多克隆抗體提取實驗——TrisCl離子交換層析法
實驗材料免疫血清雜交瘤腹水飽和硫酸銨粗提品試劑、試劑盒DE32或DE52纖維素Tris-ClNaClNaOHHCl儀器、耗材層析柱透析袋紫外分光光度計實驗步驟一、材料和試劑 1. DE32或DE52纖維素。 2. HCl；NaOH；0.01～0.05 mol/L，pH8.0 PB；0.01 mol/L，pH8.6 Tris-Cl；0.5 mol/L NaCl。 3. 待純化標本：雜交瘤腹水或培養上清，免疫血清或飽和硫酸銨粗提品。 4. 1.5x50 cm 層析柱；透析袋；紫外分光光度計及其他透析和層析所需的試劑和器材。 二、操作步驟 1. DE52纖維素的處理：DE52經酸、堿處理，0.01 mol/L，pH8.6 Tris-Cl平衡。 2. 裝柱：將層析柱固定于滴定架上，柱底墊一圓形尼龍......閱讀全文
多克隆抗體提取實驗——TrisCl離子交換層析法
實驗材料免疫血清雜交瘤腹水飽和硫酸銨粗提品試劑、試劑盒DE32或DE52纖維素Tris-ClNaClNaOHHCl儀器、耗材層析柱透析袋紫外分光光度計實驗步驟一、材料和試劑?1. ?DE32或DE52纖維素。?2. ?HCl；NaOH；0.01～0.05 mol/L，pH8.0 PB；0.01 mo
多克隆抗體提取實驗——TrisPO4－離子交換層析法
實驗材料免疫血清雜交瘤腹水飽和硫酸銨粗提品試劑、試劑盒DE32纖維素DE52纖維素梯度洗脫液Tris-PO4儀器、耗材層析柱透析袋紫外分光光度計實驗步驟一、材料和試劑?1. ?DE32或DE52纖維素。?2. 待純化標本：雜交瘤腹水或培養上清，免疫血清或飽和硫酸銨粗提品。?3. 1.5x50 cm
離子交換層析法提取IgG簡介
常用的離子交換劑有DEAE纖維素或QAE纖維素，以QAE-Sephadex最為理想，DE22、32、52也可應用。取QAE-SephadexA25或A50經酸處理并在0.05mol/LpH7.5～8.6的磷酸鹽緩沖液中平衡，將水分抽干，稱濕重Ig加于10ml血清中，在室溫30min后，離心或過濾
多克隆抗體提取實驗
實驗材料 血清試劑、試劑盒 DEAE纖維素磷酸鹽緩沖液儀器、耗材 燒杯布氏濾斗濾紙實驗步驟 1. ?稱取DEAE-纖維素(DE32或DE52)50 g，置于1 000 ml燒杯中，先以蒸餾水漂浮除去細顆粒，再經酸堿處理后，用0.01～0.05 mol/L，pH8.0左右的磷酸鹽緩沖液(PB)平衡
離子交換柱層析法（層析實驗簡介）概略
一、??? 原理：有些高分子物質含有一些可以分離的基因，例如-SO3H，-COOH等，因此可以和溶液中的離子產生交換反應。如：R-SO3H＋M+ ———— R-S3M＋H+或R-NH3OH＋CL－? —————? R-NH3CL＋OH－這類高分子物質通稱離子交換劑，其中使用最普遍的是離子交換樹脂。由
關于離子交換層析法提取IgG的介紹
常用的離子交換劑有DEAE纖維素或QAE纖維素，以QAE-Sephadex最為理想，DE22、32、52也可應用。取QAE-SephadexA25或A50經酸處理并在0.05mol/LpH7.5～8.6的磷酸鹽緩沖液中平衡，將水分抽干，稱濕重Ig加于10ml血清中，在室溫30min后，離心或過濾
離子交換層析法濃縮蛋白實驗
實驗方法原理 離子交換層析可用于濃縮蛋白質溶液。因為大多數蛋白質的等電點均低于 8， 所以它們可在 pH 值為 8 的弱離子強度溶液中被陰離子交換樹脂吸附。用離子強度大的溶液可簡單的將它們洗脫下來，達到濃縮的目的。實驗材料 蛋白質溶液儀器、耗材 離子交換樹脂層析柱實驗步驟 1. 準備離子交換樹脂，裝
離子交換層析法濃縮蛋白實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 離子交換層析可用于濃縮蛋白質溶液。因為大多數蛋白質的等電點均低于 8， 所以它們可在 pH 值為 8 的弱離子強度溶液中被陰離子交換樹脂吸附。用離子強度大的溶液可簡單的將它們洗脫下來，達到濃縮的目的。
離子交換層析法濃縮蛋白實驗
實驗方法原理離子交換層析可用于濃縮蛋白質溶液。因為大多數蛋白質的等電點均低于 8， 所以它們可在 pH 值為 8 的弱離子強度溶液中被陰離子交換樹脂吸附。用離子強度大的溶液可簡單的將它們洗脫下來，達到濃縮的目的。實驗材料蛋白質溶液儀器、耗材離子交換樹脂層析柱實驗步驟1. 準備離子交換樹脂，裝配層析柱
多克隆抗體提取實驗——批量提取法
由多種抗原決定簇刺激機體，相應地就產生各種各樣的單克隆抗體，這些單克隆抗體混雜在一起就是多克隆抗體。主要用于（1）批量提取多個抗體（2）為進一步驗證抗體的作用進行基礎操作。實驗方法原理由多種抗原決定簇刺激機體，相應地就產生各種各樣的單克隆抗體，這些單克隆抗體混雜在一起就是多克隆抗體，機體內所產生的抗
離子交換層析法
離子交換層析法是以具有離子交換性能的物質作固定相，利用它與流動相中的離子能進行可逆的交換性質來分離離子型化合物的一種方法。⒈ 離子交換劑預處理和裝柱 對于離子交換纖維素要用流水洗去少量碎的不易沉淀的顆粒，以保證有較好的均勻度，對于已溶脹好的產品則不必經這一步驟。溶脹的交換劑使用前要用稀酸或稀堿處
離子交換層析法
離子交換層析法（ion exchange chromatography，簡稱IEC）是從復雜的混合物中，分離性質相似大分子的方法之一，依據的原理是物質的酸堿性、極性，也就是所帶陰陽離子的不同。電荷不同的物質，對管柱上的離子交換劑有不同的親和力，改變沖洗液的離子強度和pH值，物質就能依次從層析柱中分離
離子交換柱層析分離核苷酸實驗_離子交換層析法
本實驗以酵母RNA 為材料, 將RNA 用堿水解成單核苷酸,再用離子交換柱層析進行分離, 最后采用紫外吸收法進行鑒定。旨在了解并掌握RNA 堿水解的原理和方法，掌握離子交換柱層析的分離原理和方法，熟練掌握紫外吸收分析方法。實驗方法原理本實驗以酵母RNA 為材料, 將RNA 用堿水解成單核苷酸,再用離
離子交換層析實驗離子交換層析技術
離子交換層析實驗可應用于：（1）分離純化蛋白質；（2）分離氨基酸；（3）分離核酸、核苷酸及其它帶電荷的生物分子。實驗方法原理離子交換層析（Ion Exchange Chromatography簡稱為IEC）是以離子交換劑為固定相，依據流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進行可逆交換時的結合力大小的
離子交換層析實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 離子交換緩沖液儀器、耗材 離子交換層析柱梯度混合器電導表實驗步驟 1. ?配制離子交換層析緩沖液，安裝好層析柱，但以離子交換層析緩沖液取代其中的凝膠過濾緩沖液。?2. ?用起始梯度的緩沖液溶解含蛋白質混合物的樣品。3. ?棄去柱床上部的大部分緩沖液，并將樣品加在凝膠的頂
離子交換層析實驗
基本方案 離子交換層析介質和層析柱的選擇 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質 試劑
離子交換層析實驗
離子交換層析技術 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 離子交換層析（Ion Exchange Chromatography簡稱為IEC）是以離子交換劑為固定相，依據流動相中的組分離
離子交換層析法原理
離子交換層析法（ionexchangechromatography，簡稱IEC）是從復雜的混合物中，分離性質相似大分子的方法之一，依據的原理是物質的酸堿性、極性，也就是所帶陰陽離子的不同。電荷不同的物質，對管柱上的離子交換劑有不同的親和力，改變沖洗液的離子強度和pH值，物質就能依次從層析柱中分離出來
離子交換層析法簡介
離子交換層析法(Ion Exchange Chromatography簡稱為IEC)是以離子交換劑為固定相,依據流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進行可逆交換時的結合力大小的差別而進行分離的一種層析方法。常用的離子交換劑有:離子交換纖維素、離子交換葡聚糖和離子交換樹脂 。
多克隆抗體純化實驗_辛酸提取法
辛酸提取法可用于分離提取人、兔、小鼠血清中的Ig及雜交瘤誘生的腹水和培養上清液中McAb。實驗材料動物血清樣品試劑、試劑盒正辛酸醋酸緩沖液PBS儀器、耗材透析袋高速低溫離心機實驗步驟一、材料和試劑?1. ? 正辛酸?2. ?60 mmol/L，pH4.0醋酸緩沖液，PBS?3. ?透析袋?4. ?高
親和層析法(affinity－chromatography)純化多克隆抗體
【實驗原理】如圖所示，親和層析的高度選擇性使得從某一初始材料中純化，富集某一含量較低的目的蛋白成為可能，因此親和層析是蛋白質分離純化過程中最有效的方法之一。另外，如果配基與蛋白質的親和能力很強，也可同時進行樣品的濃縮。 雖然多數情況下不需要將抗體與其他血清蛋白分開，但如果一旦需要，蛋白A親和層析
離子交換層析法蛋白質的純化實驗
離子交換層析法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 可進行離子交換的蛋白質在實驗條件下必須有單一電荷。溶液中單一電荷的蛋白質可被離子交換樹脂上的小離子置換（指與蛋白質末端離子的交換
離子交換層析法蛋白質的純化實驗
離子交換層析在純化蛋白質的層析手段中使用最為廣泛。它對蛋白質的分辨率高，操作簡易，重復性好，成本低。按照離子交換原理，蛋白質可從大量緩沖性溶液中被分離，所以此方法尤適于蛋白質粗提物的初始純化。在分離蛋白質時，速度往往是很重要的。 如蛋白酶的初始分離和不穩定蛋白質的純化。離子交換層析提供了很多加速分離
離子交換層析法蛋白質的純化實驗
實驗方法原理 可進行離子交換的蛋白質在實驗條件下必須有單一電荷。溶液中單一電荷的蛋白質可被離子交換樹脂上的小離子置換（指與蛋白質末端離子的交換）；固定在樹脂上。通過提高溶液中相反離子濃度或降低蛋白質所帶電荷數等方法可將蛋白質從樹脂上洗脫下來。利用此法，可根據不同蛋白質電荷性質不同而將其分離開來。若已
離子交換層析實驗（四）
六、實例: 復雜蛋白質混合物的分離采用離子交換層析分離復合蛋白質混合物的一個典型例子就是從乳清中分離蛋白質。它可以進行一定程度的工業化放大，但也可作為一個廉價的檢測體系用于離子交換劑的評價。實際上, 我們也已經通過這種蛋白質混合物來比較不同供應商所提供的離子交換劑的吸附能力（Hahnetal.，
離子交換層析實驗（一）
一、實驗原理離子交換層析用于蛋白質分離的原理的最簡單解釋是，基于帶相反電荷分子間的相互吸引力。蛋白質表面所帶的電荷取決于其 Pl 和環境 PH。構成離子交換劑的基礎介質通常為多孔珠形式，可以為蛋白質的吸附提供足夠大的表面積。固定于基礎介質上的帶電配基可以帶正電荷也可以帶負電荷。為提高介質的結
離子交換層析實驗（二）
三、結合條件根據離子交換平衡的一般性原理，很顯然，應在很低的鹽濃度條件下對蛋白質進行上樣 (圖 22.1)。鹽濃度也必須適當地調節，這具體取決于離子交換劑配體的密度。通常推薦的鹽濃度為 1 〇?100_〇 l/L 的緩沖液，其電導率相應為 1?4mS/cm。來源于細菌培養物的一般性原料或細胞
離子交換層析實驗（三）
五、離子交換層析柱的操作以下是離子交換層析柱操作的一般性步驟。此外還需要一些專用步驟以確保離子交換劑在使用時保持穩定。這些步驟如下：’(1) 加載鹽溶液；(2) 平衡層析柱；(3) 蛋白質上樣；(4) 洗去未結合物質；(5) 洗脫；(6) 再生；(7) 消毒處理。一般操作條件如表 22.2 所 TK
離子交換層析法基本介紹
離子交換層析法(Ion Exchange Chromatography簡稱為IEC)是以離子交換劑為固定相，依據流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進行可逆交換時的結合力大小的差別而進行分離的一種層析方法。常用的離子交換劑有:離子交換纖維素、離子交換葡聚糖和離子交換樹脂 。 離子交換層析法中
DEAE纖維素柱層析純化酶蛋白實驗——離子交換層析法
本實驗目的是以柱層析的方法進一步純化蔗糖酶蛋白，利用DEAE 纖維素樹脂作為離子交換劑進行柱層析分級分離。實驗方法原理利用DEAE纖維素樹脂作為離子交換劑進行柱層析分級分離。實驗材料酶蛋白試劑、試劑盒DEAE纖維素NaOHHCLTris-HCl緩沖液NaCl儀器、耗材層析柱收集器磁力攪拌器攪拌子燒杯