如何又快又好地凍存細胞？

　　細胞凍存是細胞培養中的重要環節。大家都知道，凍存技術要點是慢凍，標準的凍存程序為降溫速率-1～-2oC/ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5 oC～-10 oC /min。之前，常用的傳統方法是將凍存管置于4 oC 30分鐘--->-20 oC 60分鐘--->-80 oC過夜--->液氮罐。不過，由于步驟較多，間隔時間又長，很容易遺忘。

　　之后，人們也開始使用程序降溫盒。將凍存管放入程序降溫盒中，再將程序降溫盒放入-80oC冰箱。由于程序降溫盒中填充了異丙醇，所以能以1oC/min的速度進行降溫。然而，異丙醇屬于有毒溶劑，又容易揮發，長期使用不但會對環境造成污染，也對實驗人員的安全有不利影響。

　　邁阿密大學生物系的Kai Y為我們介紹了一種新的細胞程序降溫盒。這種名為CoolCell的降溫盒由美國Biocision公司生產，不需要使用酒精，就能以1oC/min的速度對細胞降溫。他表示，這種容器很容易放凍存管，在冷凍之后也很容易打開，使用很方便。

　　基于熱傳導原理和精密工程而開發，CoolCell可精確控制降溫速度，適用于原代細胞、細胞系、干細胞、酵母及其他細胞類型。同時，由于不使用異丙醇，也更加環保。

　　據介紹，目前CoolCell已經被包括ATCC等眾多機構以及科研單位所采用，代替他們之前使用的基于異丙醇的細胞程序降溫盒。從客戶的反饋來看，CoolCell與之前的產品在凍存細胞效果上一樣好，尤其是在原代細胞的凍存上，CoolCell的結果更加穩定。

　　之前，研究人員利用CoolCell及其他常用的方法對兩種胚胎干細胞系（RC-7和RC-10）進行凍存，并比較解凍后的細胞復蘇率。他們發現，使用CoolCell，活細胞數提高33%，而附著在組織培養板上的干細胞數量增加。此外，不使用異丙醇，每年可節省相關的處理費用340美元。

　　如今，CoolCell這種細胞凍存方案已經被收入《Current Protocols in Immunology》的Cryopreservation and Thawing of Cells中，作為細胞凍存的標準protocol進行推廣。這種降溫盒也有多種規格，適合不同大小的凍存管，在選購時需要注意。