實時無標記細胞分析技術（RTCA）常見問題解析（一）

身在實驗室中的您，RTCA 實驗做了很多，操作越來越嫻熟，實驗曲線也越來越漂亮，當沉浸在實驗成功的喜悅中時，是不是也有對 RTCA  技術的些許疑惑和問題？不用擔心，下面昊諾斯就馬上為您奉上豐盛的 RTCA 技術 FAQ 套餐，將您心中的問題一網打盡！

技術原理篇

Q: 什么事實時無標記細胞功能分析技術？

A: 艾森實時無標記細胞功能分析技術（RTCA）整合了微電子技術、細胞生物學和分子生物學。技術的核心是微電子生物感應芯片，這些芯片整合在細胞培養板的孔中，使得細胞功能分析儀無需任何標記就可以實時檢測活細胞的活性。實時無標記細胞功能分析儀可以簡單、可靠地檢測到細胞的參數，比如黏附力、伸展、生長、死亡，甚至特異的形態改變。

Q: 實時無標記細胞功能分析儀衡量的什么？

A: 活細胞與檢測板孔中微電極相互作用，產生電阻抗的改變，系統用我們自主開發的計算方法，將這些信號轉化為特定的參數——細胞指數（Cell Index）。細胞指數很好地衡量了細胞的狀態——生長、擴散、形狀改變、死亡、應激等。細胞指數已經被多家雜志評論并采納。

Q: 什么是細胞指數（Cell Index）？如何計算出來的？代表的意義是什么？為什么不直接顯示阻抗值？

A: 細胞指數是一個無量綱的參數，由RTCA測得的阻抗值通過標準公式推算獲得。

細胞指數指示檢測孔中的細胞活性，做為細胞表型的綜合檢測指標，細胞指數的變化反映了細胞的數目、形態、粘附及大小的綜合變化。
由于每個檢測孔分布的位置不同，阻抗值的檢測也有一定的差異，由阻抗值推算的細胞指數可以去除阻抗的本底差異，保證細胞指數反映的是檢測細胞的活性和狀態。

Q: 細胞指數（Cell Index）反應的是哪些信息？不同的特征曲線之間及同一曲線不同的時間段所代表的生理意義如何進行區分？

A: 細胞指數反應的是細胞數目和細胞粘附狀態的變化，細胞數量越多，細胞指數越大，而細胞貼壁狀態的變化也會影響細胞指數的變化，如細胞貼壁后鋪展開，細胞指數也會增大，或是細胞受到刺激后產生收縮等反應，都會影響到細胞指數的變化。

不同的特征曲線表示的是不同細胞所特有的貼壁，鋪展，增殖的狀態，或是某個細胞在不同的刺激條件下特有的反應狀態的變化。

同一曲線不同的時間段則代表了細胞在不同時間段內的特殊狀態，如加入細胞后的初期，是細胞貼壁及鋪展時的特殊曲線，后面一段時間則是細胞處于對數生長期的特殊曲線，加入了一定刺激后的曲線則是反映細胞對該刺激的應激變化的特殊曲線。

Q: 這些電阻抗信號是不是會以某種方式影響細胞？

A: 不會。RTCA 的檢測電壓為 22mV，而通常的細胞生物電可以達到 70mV 。同時，我們的大量驗證實驗也證明了電場對細胞及檢測沒有影響。

Q: 電流對細胞是否有影響？

A: 電極上實際存在的電流非常的微弱，只有幾十至幾百微安，經過長時間各個方面的驗證，其對細胞的生長不會產生明顯的影響

儀器知識篇

Q: 主機長時間放于培養箱內會不會影響培養箱內的環境？如何保證無菌？

A: 不會，RTCA 分析儀在生產過程中經過特殊處理，并且經過公司內部的測試，對培養箱內部的環境不會產生明顯的影響。要保證其無菌只需要按照培養箱正常的清潔維護程序進行，定期的清理培養箱的同時對分析儀進行表面清潔即可。

Q: 培養箱內的濕熱環境是否會對主機上的檢測針造成腐蝕，如何避免？

A: 正常的培養箱內濕熱環境對檢測針的腐蝕是非常小的，若外界或培養箱中存在比較特殊的腐蝕物質則有可能對儀器產生一定的腐蝕作用。

要想避免腐蝕作用首先要盡量保證實驗室和培養箱中有比較正常的環境；其次要避免在實驗過程中將液體灑出來濺到檢測針上，若發生類似情況，請第一時間對針進行清潔；第三是要定期使用儀器配套的清潔工具對針進行清潔，若有由于液體濺落或是異常環境影響導致接觸不良的針，需要及時更換。

另外，也可在不使用儀器時將電阻板安裝在儀器上，避免濕熱環境和針的直接接觸。

Q: 細胞與 E-plate 底部電極之間是否直接接觸？

A: 是的，細胞會貼在 E-plate 底部電極上生長，細胞在電極上生長引起阻抗增加，從而獲得信號。

Q: E-plate 孔內培養溶液中的離子是否對底部電極有影響？

A: 有一定的影響，不同的離子會有不同的阻抗，因此我們會在加入細胞之前先添加培養基測定基線，即先將該細胞使用的培養基的信號定為 0，以去除影響。

Q: E-plate 電極板底部采用的的玻璃板材料與常規培養用細胞板采用的塑料板有何區別？

A: E-plate電極板使用的玻璃材料和常規細胞培養板使用的塑料材料，都同樣具有生物相容表面，我們經過特殊的處理，使玻璃板表面的細胞貼壁及生長情況達到與常規細胞培養板的塑料板表面基本一致。

Q: E-plate 檢測板可以重復使用嗎？

A: 跟傳統細胞培養板一樣，他們是不重復使用的。

Q: E-plate 檢測板可以用不同的基質處理嗎？

A: 可以。平板可以用任意基質，比如多聚賴氨酸或纖粘連蛋白等覆蓋，以加強或者防止細胞黏附。

Q: 當我可以購買便宜的塑料平板并獲得一樣結果的時候，為什么我要使用 E-plate 檢測板？相對于標準滴定板技術，為這個系統付出的成本是否值得？

A: 艾森生物提供用戶很多節省成本的機會。第一，該細胞功能分析儀不需要昂貴的標記，也不需要昂貴的光學系統。這對于大多數實驗室來說都是很大的節省。第二，因為 E-plate 檢測板連續自動地讀取，勞動力需求就大大減少了。此外，實驗過程可以獲取大量完整的生物學信息，而現行的系統是不可能完成的。

Q: 不同孔的測量是獨立的嗎？

A: 是的，每個孔都是采取有序的方式獨立測量的，實時無標記細胞功能分析儀檢測的相當于是所有微孔底部表面。另外，孔與孔之間的精度和準確度也很高。在我們實驗室，我們通常能夠獲得孔與孔之間 CV（變異系數）小于 10％。

Q: 細胞如何黏附在微孔底部？

A: 細胞黏附在微孔底部平坦的微金電極上，這些微金電極覆蓋底部 75％ 的表面。實時無標記細胞功能分析儀的所有組件都是非生物排斥的， E-plate 檢測板經過消毒和組織培養處理。艾森生物廣泛的質量控制過程保證用戶使用 E-plate 檢測板實驗結果的一致性。

Q: 不同批次的E-Plate 板，在細胞種類和接種量等參數一定時，實驗是否能有良好的重復性？

A: 在細胞種類和接種數量一定時，若細胞代數，細胞狀態等條件也基本保持一致，則可以出現比較良好的重復性。

Q: 用 E-Plate 檢測后的細胞還能做其他實驗嗎？

A: 可以，由于 RTCA 技術是無標記無創傷的技術，對于細胞沒有任何損害，所以檢測后的細胞可以用來進行其他實驗。

Q: E-Plate板可用酶標儀檢測嗎？

A: 不可以，E-Plate 板底面有金電極不易透光，因此不能直接用酶標儀檢測，可以將孔中的液體吸入常規細胞培養板中再用酶標儀檢測。

Q: 可視窗口在哪里？有什么用途？

A: 可視窗口在 E-Plate 板孔的正中間，主要是為了方便顯微鏡下觀察細胞的狀態。