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  • 發布時間:2019-05-22 16:22 原文鏈接: 小鼠水痘帶狀皰疹病毒IgG(VZVIgG)酶聯免疫分析試劑盒

    小鼠水痘帶狀皰疹病毒IgG(VZV-IgG)酶聯免疫分析

    試劑盒使用說明書

    本試劑僅供研究使用       目的:本試劑盒用于測定小鼠血清,血漿及相關液體樣本中水痘帶狀皰疹病毒IgG(VZV-IgG)的含量。

    實驗原理:

       本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中小鼠水痘帶狀皰疹病毒IgGVZV-IgG)水平。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被單抗的微孔中依次加入VZV-IgG,再與HRP標記的羊抗人抗體結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的VZV-IgG呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中鼠水痘帶狀皰疹病毒IgGVZV-IgG)濃度。

     

    試劑盒組成

    試劑盒組成

    48孔配置

    96孔配置

    保存

    說明書

    1

    1


    封板膜

    2片(48

    2片(96


    密封袋

    1

    1


    酶標包被板

    1×48

    1×96

    2-8保存

    標準品:90pg/ml

    0.5ml×1

    0.5ml×1

    2-8保存

    標準品稀釋液

    1.5ml×1

    1.5ml×1

    2-8保存

    酶標試劑

    3 ml×1

    6 ml×1

    2-8保存

    樣品稀釋液

    3 ml×1

    6 ml×1

    2-8保存

    顯色劑A

    3 ml×1

    6 ml×1

    2-8保存

    顯色劑B

    3 ml×1

    6 ml×1

    2-8保存

    終止液

    3ml×1

    6ml×1

    2-8保存

    濃縮洗滌液

    20ml×20倍)×1

    20ml×30倍)×1

    2-8保存

     

    樣本處理及要求

    1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。

    2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

    3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

    4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

    5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

    6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20保存,但應避免反復凍融.

    7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

     

    操作步驟:

    1.         標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在第一、第二孔中分別加標準品100μl,然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為60pg/ml 40pg/ml20pg/ml10pg/ml5pg/ml)。

    2.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

    3.         溫育:用封板膜封板后置37溫育30分鐘。

    4.         配液:將30

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