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  • 發布時間:2020-08-18 10:01 原文鏈接: 斑點金免疫滲濾測定(DIGFA)實驗

    實驗方法原理 斑點金免疫滲濾測定法是在斑點免疫滲濾測定法基礎上,改用膠體金標記物代替酶,省去底物顯色的步驟。試驗方法是以硝酸纖維素膜(NC膜)為載體,將試劑及標本滴加在膜上,通過滲濾而逐步反應。全過程可于數分鐘內完成,陽性結果在膜上呈紅色斑點。


    實驗材料 細胞樣品


    試劑、試劑盒 PBS吐溫-20BSA特異性抗體 抗原金標抗體


    儀器、耗材 滲濾裝置NC膜


    實驗步驟


    一、試劑及材料

     

    1.  滲濾裝置:為一塑料小盒(4x3x0.6 cm),分為底、蓋兩層,蓋的中央有一個直徑0.5 cm的小孔。盒底充填吸水性較強的墊料,蓋孔下,緊貼墊料放置一片NC膜。緊閉盒蓋,即為滲濾裝置。在孔中的NC膜上點加1-2 ml特異性抗體(一抗)或抗原,室溫自然干燥,保存于放干燥劑的密封塑料袋中備用。

     

    2.  封閉液:含0.2%BSA和0.05%吐溫-20的洗滌液。

     

    3.  洗滌液:50 mol/L,pH7.2 PBS。

     

    4.  特異性抗體(一抗)或抗原

     

    5.  金標抗體

     

    二、操作方法

     

    1. 取出滲濾器,先在小孔的NC膜上,滴加2滴(約100 ml)封閉液;

     

    2. 待其滲入盒內,在NC膜上,加待檢標本1滴(約50 ml);

     

    3. 待其滲入盒內,在NC膜上,滴加2滴(約100 ml)洗滌液;

     

    4. 待其滲入盒內,在NC膜上,加金標抗體1滴(約50 ml),使其與NC膜上吸附的檢品發生反應;

     

    5. 待其滲入盒內,在NC膜上,滴加2滴(約100 ml)洗滌液;

     

    6. 至洗滌液完全滲入盒內

     

    三、結果觀察

     

    在小孔NC膜上出現紅色反應時為陽性反應,陰性反應不著色。

     

    注意事項


    1.   特異性抗體(一抗)或抗原、待檢標本和金標抗體的用量事先都必須應用方陣法確定最適用量。

     

    2.   盒底充填的墊料吸水性要強,否則影響結果。


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