體內/外DPSCs的成牙和成骨分化
| 實驗方法原理 | STRO-I是MSC的早期細胞標志分子之一，可用于鑒定DPSCs和SHED的未分化狀態。STR0-1的單克隆抗體首先是作為能與人骨髓CFU-F細胞表面高表達的分子作用的試劑被大家所認識的。DPSC和SHED中含有大約10%?20%的STRO-I陽性細胞。非常值得注意的一點，體外擴增后的DPSCs和SHED是不均一的群體，隨著連續傳代會逐漸的丟失它們的干性（STR0-1和3G5的表達丟失）。體外，在含有地塞米松、無機磷酸鹽和L-抗壞血酸的培養基中，DPSCs和SHED能分化為成牙本質細胞和成骨細胞。 |
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| 實驗材料 | |
| 試劑、試劑盒 | 滅菌MSC培養基成牙分化培養基胰蛋白酶-EDTA溶液：0.05%胰蛋白酶0.54mmol L(0.2%)EDTA 無Ca2+和Mg2+的Hank’s:平衡鹽溶液溶解 |
| 儀器、耗材 | |
| 實驗步驟 | 體外： (a)用常規MSC培養基培養細胞，直到細胞達到完全匯合。 (b)更換為成牙分化培養基，每周換2?3次培養基，持續培養6周。（匯合后，細胞可能容易從培養容器的表面脫離。因此，換培養基時要非常小心，避免細胞脫落。） 體內DPSCs的成牙和成骨分化： (a)用MSC培養基培養，直到細胞到達90%匯合。 (b)用PBSA洗培養皿，洗3次。 (c)加足夠體積的胰蛋白酶-EDTA溶液，37℃孵育。 (d)確定80%的細胞已從培養容器表面脫離，然后加MSC培養基。 (e)500g離心6min。 (f)倒掉上清，用MSC培養基重懸細胞。 (g)細胞計數。 (h)將重懸于MSC培養基的（2?4)×106個細胞和載體混合，置于1.8mL凍存管中。 (i)37℃旋轉孵育1h。 (j)無菌條件下，將混合物移植到免疫力低下的小鼠皮下。我們通常使用NIH的bg-nu/nu-xid小鼠進行移植。 (k)在合適的時間點，收集移植物，組織學檢測。（在HA/TCP載體和bg-nu/nu-xid小鼠體系中，8周的時間足夠DPSCs和SHED形成充分的礦化基質。收集的時間點主要決定于體系。） |
