流式細胞儀分選細胞的效率和純度受到以下多種因素的影響:
細胞樣本質量:
細胞的活性:死細胞或受損細胞可能影響分選效果。
細胞團塊:未充分分散的細胞團會干擾流式分析和分選。
熒光標記的質量:
抗體的特異性和親和力:選擇特異性強、親和力高的抗體以確保準確標記目標細胞。
標記效率:熒光染料與抗體的結合效率以及標記過程中的條件控制。
儀器性能:
液流穩定性:液流不穩定可能導致細胞通過檢測區的速度和位置不一致。
檢測靈敏度:影響對弱陽性細胞的檢測和分選。
分選參數設置:
閾值和電壓設置:不合適的設置可能導致誤判細胞類型。
分選條件的嚴格程度:過于寬松會降低純度,過于嚴格可能降低效率。
細胞的物理特性:
細胞大小和粒度的差異:過大或過小的細胞可能在液流中表現不同,影響分選。
操作人員的技術和經驗:
樣本制備的熟練程度。
儀器操作和參數調整的能力。
環境因素:
溫度和濕度:可能影響儀器性能和細胞狀態。
細胞表面標志物的表達水平:
低表達的標志物可能增加分選難度,降低效率和純度。
分選速度:過快的分選速度可能導致分選不準確。
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