測定食品中己烯雌酚的案例

　　一、案例

　　己烯雌酚(DES)是一種人工合成的激素類藥物，醫學上主要用于治療雌激素缺乏癥。但是其具有促進動物生長，促進動物蛋白質的合成代謝，提高動物日增重和提高飼料轉化率的作用。曾被作為動物生長促進劑用于畜禽以及水產品的養殖中。但是含有己烯雌酚的肉制品能擾亂人體內的激素平衡，導致婦女更年期紊亂，女童性早熟，男性女性化，生育能力降低；國際癌癥研究機構(IARC)研究發現DES是一種致癌物質，誘發女性乳腺癌、卵巢癌等。從1981年，世界衛生組織禁止使用己烯雌酚、己烷雌酚作為動物的生長促進劑。世界各國規定食品動物養殖中不得以任何途徑和方式使用DES，養殖動物及動物性食品中不得檢出DES。我國農業部早已明令禁止在畜牧養殖業中使用己烯雌酚及其鹽、酯等。但受利益驅動，仍有部分養殖者非法使用。為保障畜產品質量安全，我國已將其作為獸藥殘留監控的重點對象。

　　二、選用的國家標準

　　GB／T 5009．108—2003畜禽肉中己烯雌酚的測定。

　　三、測定方法

　　1．提取及凈化

　　精確稱取5.0g絞碎肉試樣，放入50mL具塞離心管中，加10.00ml。甲醇，充分攪拌，振蕩20min，于3000r／min離心10min，將上清液移出，殘渣中加lO.00mL甲醇，混勻后振蕩20min，于3000r／min離心10min，合并上清液，此時如出現混濁，需再離心10min，取上清液過0.5μmFH濾膜，備用。

　　2．色譜條件

　　①紫外線檢測器：檢測波長230nm。

　　②靈敏度：0.04AUFS。

　　③流動相：甲醇+O.043mol／L磷酸二氫鈉(70+30)，用磷酸調pH值至5。

　　④流速：1mL／min。

　　⑤進樣量：20μL。

　　⑥色譜柱：CLC—ODS—C18(5μm)6.2mm×150mm不銹鋼柱。

　　⑦柱溫：室溫。

　　3．標準曲線繪制

　　精確稱取5份(每份5.0g)絞碎的肉試樣，放入50mL具塞離心管中，分別加入不同濃度的標準液0、6.0μg／mL、12.0μg／mL、18.0μg／mL、24.0μg／mL，其中甲醇總量為20.00mL，使其測定濃度為0、0.30μg／mL、0.60μg/mL、0.90μg／mL、1.20μg／mL，按步驟一方法提取備用。

　　4．測定

　　分別取樣20μL，注入HPLC柱中，可測得不同濃度DES標準溶液峰高，以DES濃度對峰高繪制工作曲線，同時取樣液20μl，注入HPLC中，測得的峰高從工作曲線圖中查相

　　應含量，Rt一8.235

　　5．結果計算

　　式中 X一一試樣中己烯雌酚的含量，mg／kg；

　　A一進樣體積中己烯雌酚的含量，ng；

　　m——試樣質量，g；

　　V1——試樣甲醇提取液總體積，mL；

　　V2——進樣體積，mL。

　　6．試劑

　　①甲醇。

　　②0.043mol／L磷酸二氫鈉溶液：取1g磷酸二氫鈉(NaH2PO4·2H2O)溶于水，定容至500mL。

　　③己烯雌酚(DES)標準溶液：精確稱取100mg己烯雌酚(DES)溶于甲醇，移入100mL容量瓶中加甲醇定容，混勻，每毫升含DESl．0mg，儲存于冰箱中。

　　④己烯雌酚(DES)標準使用液：吸取10.00mL DES儲備液，移入100mL容量瓶，加甲醇定容，每毫升含DESl00μg。

　　⑤磷酸。

　　7．儀器

　　①高效液相色譜儀：具紫外檢測器。

　　②小型絞肉機。

　　③小型粉碎機。

　　④電動振蕩器。