實驗方法原理 比較基因組雜交（CGH)是一種能夠在一步全基因組篩查程序，描述G帶不能發現的細胞遺傳物質增加或減少的分子細胞遺傳學技術。CGH優于進行全染色體涂染（wcp)的常規熒光原位雜交（FISH)和多色FISH之處，是它不僅能夠識別增加的未知片段的染色體來源，而且還可將該片段定位于特定的染色體區帶。采用各種探針進行HSH來確定增加的染色體片段的來源，這個過程昂貴且費力，因為在識別出染色體來源之前，可能需要多種wcp探針。另外，能夠得到的位點特異性探針的數量也有限，僅能覆蓋基因組的一部分。
實驗材料 抽取核型正常男性的外周血牛血清白蛋白
試劑、試劑盒 新鮮配制的固定液秋水仙胺 PRMI胎牛血清青霉素鏈霉素L-谷氨酰胺植物血球凝集素HEPES緩沖液KClDulbecco 磷酸緩沖液胸苷溶液啟動培養基連續培養基福爾馬林固定液熒光素-2-dUTP德克薩斯紅-5-dUTP整套 dNTP 2-疏基乙醇dNTP 混合物TAE溴化乙錠瓊脂糖凝膠
儀器、耗材 巴斯德吸管染色缸PureGene DNA 純化試劑盒水浴鍋
實驗步驟
一、正常男性外周血細胞的培養
1.將核型正常男性的500?650μL新鮮全血加入10mL啟動培養基中。
2.37℃條件下培養約72h(3d)。
3.加入200mL胸苷溶液，輕輕混勻。
4.37℃培養14?18h(過夜)。
5.155g離心10min。
6.棄去上清，加入10mL 1×PBS，顛倒混勻。
7.155g離心10min。
8.棄去上清，加入10mL連續培養基，輕輕顛倒混勻。
9.37℃條件下繼續培養4?5h。
10.加入6或7滴秋水仙胺溶液，顛倒混勻。
11.37℃水浴鍋中培養20min。.
12.170g離心10min。
13.棄去上清，留約0.5mL液體。輕彈離心管幾次，徹底重懸細胞，避免細胞結塊。迅速加入0.5mL 75mol/L KCl(預熱在37℃)，輕彈離心管充分混勻，繼續加入4.5mL KC1。
14.37℃水浴鍋中孵育15min。
15.用巴斯德吸管，向每個管中從管底開始緩緩加入1mL新鮮配制的固定液，輕輕顛倒混勻。
16.170g離心10min。
17.棄上清，殘留約0.5mL液體。
18.邊混勻邊逐滴加入新鮮固定液至5mL。
19.室溫孵育約10min。
20.170g離心10min。
21.棄去上清，殘留約0.5mL液體，將沉淀打散。
22.邊混勻邊逐滴加入新鮮固定液至5mL。
23.必要的話，再重復步驟20?22，2或3次。
24.棄去上清。
25.稀釋沉淀至適當濃度。溶液應混濁、輕霧狀（如果得到沉淀較多，加入1?1.5mL固定液；如果得到沉淀較少，加入<1mL固定液）。
26.按下述二所述方法滴片。