用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析實驗—蛋白質激酶C

PKC 分析緩沖液組蛋白 HI 儲存液磷脂酰絲氨酸甘油二油酸脂

1. 在冰浴的離心管內配制如下 20 μl 反應混合物：

5X PKC 分析緩沖液                                        4 μl

10 mg/ml 組蛋白 HI 儲存液                             1 μl    

[γ-³²P] ATP（終濃度 5 μCi/5 μmol/L ATP）      1 μl

水（取決于下一步所加的激酶樣品的量）          0~14 μl 

5X PKC 分析緩沖液：

100 mmol/L Tris-HCl，30℃ 時（pH 7.5)

25 mmol/L MgCl₂

1 mmol/L CaCl₂

100 μg/ml 磷脂酰絲氨酸（PS）

10 μg/ml 甘油二油酸脂（Sigma）

2. 往預熱的反應混合物中加入 1~14 μl 激酶樣品，開始反應。

3. 于 30℃ 反應一定時間。

4. 分析反應產物。