ATP儲存液的配制
依賴環核苷酸的蛋白質激酶
蛋白質激酶C
酪蛋白激酶
酪氨酸激酶
凝膠蛋白質激酶分析
| 試劑、試劑盒 | ATP儲存液 |
|---|---|
| 實驗步驟 | 一、Mg-ATP 儲存液的配制 ATP 買來時通常是鈉鹽。大多數激酶需要 ATP 鎂鹽作為高效底物。有時可以用錳代替鎂。 1. 20 mmol/L MgCl2 或 MgSO4 2. 20 mmol/L Na2-ATP 以 1:1 的比例混合這兩種溶液，測 pH 值。慢慢將 pH 值調至 pH 7.4。如果出現沉淀，應繼續攪拌，并要保持 pH 值在 pH 7.4。這就配成了 10 mmol/L 的 Mg-ATP 儲存液。將溶液分成小份保存于 -20℃，可以放一年以上。 二、[γ-32P] ATP 使用液的配制 [γ-32P] ATP 供應商有 Amersham Int、NEN 和 ICN；通常可以買到不同比活性的 [γ-32P] ATP。適宜使用的比活性是 3000 Ci/mmol，通常剛買來時的濃度是 10 mCi/ml。Amersham’s Rerfivue [γ-32P] ATP 溶液用起來很方便，因為它可以保存于 4℃ 而不是 -20℃。 |
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