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  • 發布時間:2022-10-18 09:18 原文鏈接: 簡述TaqDNA聚合酶的熱穩定性

      相對分子質量為94的Taq DNA聚合酶的活性較高,大約為200000 U/mg,在合成DNA時有一個較高的最適溫度75~80℃。Taq DNA聚合酶雖然在90℃以上合成DNA的能力有限,但高溫時仍比較穩定。有實驗證明,在92.5℃、95℃和97.5℃時,PCR混合物中的Taq DNA聚合酶分別經130 min、40 min和5~6 min后,仍可保持50%左右的活性,其半衰期較長。所以,在一個PCR預備試驗中,每次循環時上限溫度為95℃處理20S,則循環50次后Taq DNA聚合酶仍可保持65%的活性,能夠保證實驗的需要。

      Taq DNA聚合酶具有很高的加工合成特性,在最適反應溫度時,dNTP的摻入速度為35~100 nt/(s.酶分子),最長擴增長度可達7.6 kb。在低溫條件下,Taq DNA聚合酶的活性明顯降低,導致此酶在模板內局部二級結構區域的延伸能力受阻或前進速率常數與解離常數的比值發生改變。在較高的溫度(95℃以上)時,很少有DNA合成;在體外,DNA在較高溫度時的合成速度受到引物或引物鏈與模板鏈雙鏈結構穩定性的限制。

      由于Taq DNA聚合酶的最適反應溫度高達75~80℃,故退火溫度和延伸溫度均可適當提高,這限制了非特異性擴增產物的出現,增加了PCR反應的特異性。

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