簡述TaqDNA聚合酶的熱穩定性
相對分子質量為94的Taq DNA聚合酶的活性較高,大約為200000 U/mg,在合成DNA時有一個較高的最適溫度75~80℃。Taq DNA聚合酶雖然在90℃以上合成DNA的能力有限,但高溫時仍比較穩定。有實驗證明,在92.5℃、95℃和97.5℃時,PCR混合物中的Taq DNA聚合酶分別經130 min、40 min和5~6 min后,仍可保持50%左右的活性,其半衰期較長。所以,在一個PCR預備試驗中,每次循環時上限溫度為95℃處理20S,則循環50次后Taq DNA聚合酶仍可保持65%的活性,能夠保證實驗的需要。 Taq DNA聚合酶具有很高的加工合成特性,在最適反應溫度時,dNTP的摻入速度為35~100 nt/(s.酶分子),最長擴增長度可達7.6 kb。在低溫條件下,Taq DNA聚合酶的活性明顯降低,導致此酶在模板內局部二級結構區域的延伸能力受阻或前進速率常數與解離常數的比值發生改變。在較高的溫度(95......閱讀全文
簡述TaqDNA聚合酶的熱穩定性
相對分子質量為94的Taq DNA聚合酶的活性較高,大約為200000 U/mg,在合成DNA時有一個較高的最適溫度75~80℃。Taq DNA聚合酶雖然在90℃以上合成DNA的能力有限,但高溫時仍比較穩定。有實驗證明,在92.5℃、95℃和97.5℃時,PCR混合物中的Taq DNA聚合酶分別
TaqDNA聚合酶的功能簡介
Taq DNA聚合酶的氨基酸順序,特別是氨基酸的前1/3區域,與大腸桿菌聚合酶I非常相似,因而它們屬于一種多功能酶。 1.具有5'→3'聚合作用 可以以DNA為模板,以結合在特定DNA模板上的引物為出發點,將四種脫氧核苷酸以Watson—Crick配對的方式按5'→3
TaqDNA聚合酶的基本信息介紹
Taq DNA聚合酶是第一個被發現的熱穩定DNA聚合酶,分子量65kD,最初由Saiki等從溫泉中分離的一株水生噬熱桿菌(thermus aquaticus)中提取獲得。此酶能耐高溫,在70℃反應2h后其殘留活性大于原來的90%,在93℃下反應2h后其殘留活性是原來的60%,在95℃下反應2h后
影響TaqDNA聚合酶的因素有哪些?
(一)溫度:雖然Taq DNA良合酶有很強的溫度適應范圍,但高于60℃的環境仍會使部分酶變性失活。反之,如果溫度低于正常值,酶活性受到限制。而且由于引物在低溫下(特別是25—27℃)可能與基因組中別的部分同源釣序列結合,使得一些擴增產物并非為目的序列。適當提高溫度,錯配堿基多會解離,反應產物特異
關于聚合酶鏈反應引物的量和TaqDNA聚合酶的量的介紹
(一)引物的量 引物在PCR反應中的濃度一般在0.1~1μmol/L之間。濃度過高易形成引物二聚體且產生非特異性產物。一般來說用低濃度引物經濟、特異,但濃度過低,不足以完成30個循環的擴增反應,則會降低PCR的產率。 (二)TaqDNA聚合酶的量 典型PCR反應混合物中,所用酶濃度為2.5
PCR技術(三):Taq-DNA聚合酶
Taq DNA聚合酶是從一種水生棲熱菌(Thermusaquaticus)yT1株分離提取的.yT是 一種嗜熱真菌,能在70~75℃生長.該菌是1969年從美國黃石國家森林公園火山溫泉 中分離的.(一)酶活性與熱穩定性 該酶基因全長2496個堿基,編碼832個氨基酸,酶蛋白分子為 94KDa.其比
標準的PCR反應體系
參加PCR反應的物質為模板、引物、耐熱DNA聚合酶、三磷酸脫氧核苷酸和鎂離子,其中關鍵步驟是最佳引物的設計 [2] 。 1. 模板核酸 模板(靶基因或樣品DNA)核酸的量與純化程度是PCR成敗與否的關鍵環節之一。一般臨床檢測標本,可采用快速簡便的方法溶解細胞,裂解病原體,消化除去染色體的蛋白
簡述聚合酶的聚合作用
在引物RNA'-OH末端,以dNTP為底物,按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐個將核苷酸加上去,就是DNApolⅠ的聚合作用。酶的專一性主要表現為新進入的脫氧核苷酸必須與模板DNA配對時才有催化作用。dNTP進入結合位點后,可能使酶的構象發生變化,促進3'-OH與5'
關于PCR,你知道多少?(四)Taq-DNA聚合酶
在PCR反應中,毫無疑問的DNA聚合酶是最關鍵的因素。PCR最初使用的DNA聚合酶是大腸桿菌DNA聚合酶 I的Klenow片段。但該酶存在很多缺陷,使之不能廣為應用,比如:熱穩定性差,每次DNA熱變性后大部分酶都被滅活,需要重新加入,每個循環都要重新加入;Klenow酶反應溫度較低,引物和模板容易形
酸式鹽熱穩定性介紹
一般為正鹽熱穩定性大于酸式鹽熱穩定性。Na2CO3受熱不易分解 ,2NaHCO3Na2CO3+CO2↑+H2OCaCO3=CaO+CO2↑(條件高溫),Ca(HCO3)2CaCO3+CO2↑+H2O
簡述基因擴增技術—聚合酶鏈反應的標本制備
在將Taq DNA聚合酶引入基因擴增技術—聚合酶鏈反應反應,并使之達到自動化之后,基因擴增技術—聚合酶鏈反應反應已變得十分的簡單了。但是PCR樣品的采集及制備卻并非同樣簡單,而且,許多PCR的失敗都歸因于標本的制備不當。用于PCR的標本必須經適當處理后才能使用,因為標本中的許多雜質能抑制Taq
耐熱DNA聚合酶的應用介紹
DNA序列測定中應用的耐熱DNA聚合酶 1.Promega公司測序級TaqDNA聚合酶 是在TaqDNA聚合酶的基礎上對它進行修飾,去除5'-3'外切酶活性,保證測序記過的高度準確性,可產生強度均一的測序條帶,背景清晰。 2.Bca Best DNA 聚合酶 從Bacil
比較詳細的PCR
1.PCR反應的最適條件4.1 TaqDNA聚合酶在早期進行的PCR反應中,使用的是大腸桿菌DNA聚合酶1的大片段,,即Klenow片段。也曾有人用噬菌體T4 DNA聚合酶。這兩種酶的共同弱點是對熱不穩定性,DNA合成反應只能在370C進行。PCR時每一循環的解鏈溫度都在90C以上進行,故在每兩個循
簡述聚合酶鏈式反應檢查的臨床意義
PCR能快速特異擴增任何已知目的基因或DNA片段,并能輕易在皮克(pg)水平起始DNA混合物中的目的基因擴增達到納克、微克、毫克級的特異性DNA片段。因此,PCR技術一經問世就被迅速而廣泛地用于分子生物學的各個領域。 異常結果: 各種疾病所致的異常,例如梅毒。 ①一期梅毒。即硬下疳 ,潛伏期
實驗室常用的耐熱DNA聚合酶的相關介紹
耐熱DNA聚合酶多應用在PCR技術中。各種耐熱DNA聚合酶均具有5'-3'聚合酶活性,但不一定具有3'-5'和5'-3'的外切酶活性。3'-5'外切酶活性可以消除 錯配,切 平末端;5'-3'外切酶活性可以消除合成障
PCR實驗原理及反應要素
聚合酶鏈式反應一、發展簡史聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction,PCR)是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術,它可看作是生物體外的特殊DNA復制,PCR的最大特點,是能將微量的DNA大幅增加。因此,無論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸,還是幾十年前兇殺案中
PCR技術的特點介紹
1、有一定程度單核苷酸錯誤摻入? ? TaqDNA聚合酶缺少3’-5’核酸外切酶活性,因而不能糾正反應中發生的核苷酸錯誤摻人;與大腸桿菌聚合酶IKlenow片段相比較,用TaqDNA聚合酶的反應錯誤摻人相對多些。但在PCR擴增過程中,其錯配率一般只有約1/萬,足可以供特異性分析。2、操作簡便、快速?
PCR中子鏈延伸階段需要的酶是
DNA聚合酶(常用TaqDNA聚合酶,高保真的pfu等)DNA聚合酶的作用是以一條DNA單鏈為模板,將三磷酸脫氧核糖核苷酸通過磷酸二酯鍵連接成為與單鏈互補的另一條單鏈。
增強光譜儀的熱穩定性
增強光譜儀的熱穩定性用于USB光譜儀的溫度控制USB溫控器(USB-TC)是USB2000+和USB4000光譜儀的可直連式控溫裝置。該產品對光具座以及光具座組件中出現的溫度變化進行控制,溫度變化會造成波長和基線漂移、譜峰畸變、并會影響探測器的靈敏度。USB-TC適用于生產車間或其他工業
鋰離子電池的熱穩定性的介紹
鋰離子電池的安全問題是不安全電解質直接導致的,但從根源上來說,是因為電池本身的穩定性不高,熱失控的出現導致的。而熱失控的發生除了電解質的熱穩定性原因,電極材料的熱穩定性也是最重要的原因之一,所以提高電極材料的熱穩定性也是提高電池安全性的重要環節,但是這里所說的電極材料熱穩定性不但包括其自身的熱穩
聚合酶的分類
可分為以下幾個類群:(1)依賴DNA的DNA聚合酶;(2)依賴RNA的DNA聚合酶;(3)依賴DNA的RNA聚合酶;(4)依賴RNA的RNA聚合酶。前兩者是DNA聚合酶,它使DNA復制鏈按模板順序延長。如在原核生物中僅就大腸桿菌中已被發現的就有三種(分別簡稱為PolⅠ,PolⅡ和PolⅢ等);DNA
聚合酶的分類
可分為以下幾個類群:(1)依賴DNA的DNA聚合酶;(2)依賴RNA的DNA聚合酶;(3)依賴DNA的RNA聚合酶;(4)依賴RNA的RNA聚合酶。前兩者是DNA聚合酶,它使DNA復制鏈按模板順序延長。如在原核生物中僅就大腸桿菌中已被發現的就有三種(分別簡稱為PolⅠ,PolⅡ和PolⅢ等);D
pcr技術擴增dna需要的條件是什么
Pcr 技術擴增DNA 需要的條件是:DNA模板鏈,脫氧核苷酸原料, TaqDNA的聚合酶,引物等。
pcr技術擴增dna需要的條件是什么
Pcr 技術擴增DNA 需要的條件是:DNA模板鏈,脫氧核苷酸原料, TaqDNA的聚合酶,引物等。
如何理解pcr擴增的原理和過程
PCR擴增的原理和操作步驟[資料]PCR擴增反應的操作第一節PCR擴增反應的基本原理一、聚合酶鏈式反應(PCR)的基本構成PCR是聚合酶鏈式反應的簡稱,指在引物指導下由酶催化的對特定模板(克隆或基因組DNA)的擴增反應,是模擬體內DNA復制過程,在體外特異性擴增DNA片段的一種技術,在分子生物學中有
pcr反應五要素
參加PCR反應的物質主要有五種即: ①模板DNA, ②寡核苷酸引物, ③dNTP, ④反應緩沖液, ⑤TaqDNA聚合酶。
DNA聚合酶有什么作用
DNA作為遺傳物質的基本特點就是能夠準確地進行自我復制。在合成DNA時,決定其結構特異性的遺傳信息來自其本身,必須由原來存在的DNA分子為模板來合成新的DNA分子。這種以自身DNA為模板,以脫氧核苷酸為底物催化合成新的DNA的酶稱為DNA聚合酶。在微生物、植物和動物中都發現有這種酶,而且原核細胞和真
α2HS熱穩定性糖蛋白的概述
α2-HS又稱為熱穩定性糖蛋白,大部分由肝臟合成,是骨基質的一種組成成分,在血中的半衰期為4~5天。免疫電泳位置比結合珠蛋白稍快,位于Gc球蛋白與結合珠蛋白之間。
了解量熱儀測定煤的熱穩定性
熱穩定性好的煤在燃燒或氣化過程中能以其原來的粒度燃燒或氣化而不碎成小塊或破碎較少;熱穩定性差的煤在燃燒或氣化過程中迅速破成小塊,甚至成為煤粉。要求使用塊煤作燃料或原料的工業層燃鍋爐或煤氣發生爐,如果使用熱穩定性差的煤,將導致帶出物增多、爐內粒度分布不均勻而增加爐內流體阻力,嚴重時甚至形成風洞而導致結
鋰電池負極材料熱穩定性的介紹
通常負極材料熱穩定性是有其材料結構和充電負極的活性決定的。對于碳材料,球形碳材料,如中間相碳微球(MCMB)相對于鱗片狀石墨,具有較低的比表面積,較高的充放電平臺,所以其充電態活性較小,熱穩定性相對較好,安全性高。而尖晶石結構的Li4Ti5O12,相對于層狀石墨的結構穩定性更好,其充放電平臺也高