生物堿的提取分離
1．總生物堿的提取和親脂性與親水性生物堿的分離
注一：將漢防已粗粉加適量酸水液，以能將生藥粉末潤濕為度（約150ml），充分拌勻，放置半小時，均勻而致密地裝入滲筒內，用錐形瓶底部或其它平底工具壓緊，供滲漉用，流速約1.5ml/分。
注二：凈砂必須事前洗凈烘干，拌和量最好不要超過120g，以免索氏提取器一次裝不下或裝得過多。提不盡生物堿。
注三：檢查生物堿是否提盡的方法，是取最后一次乙醚提取液約數滴，揮去乙醚，殘渣加5%HCl 0.5ml溶解后，加改良碘化鉍鉀試劑一滴，無沉淀折出或明顯渾濁時，表明生物堿已提盡，或基本提盡。反之，應繼續提取。
注四：先將提取器內濾紙筒取出。然后將提取玻筒內最后一次乙醚提取液傾出（另器貯存），再將提取玻筒安裝好，繼續加熱，回收燒瓶中乙醚于玻筒中，至燒瓶內的乙醚提取液體積較小時，停止回收，將燒瓶中乙醚提取液傾出。
2．低壓柱層析分離漢防已甲素和乙素
低壓柱層析在低壓下（0.5~3kg/cm2，一般0.3~1.2
kg/cm2）采用顆粒直徑介于經典柱層析（100~200μm）和HPLC（~37μm）之間的薄層層析用硅膠（或氧化鋁）H或G（50~75μm）作為填充劑的一種柱層析柱，其基本原理與HPLC相同，分離效果也介于經典柱與HPLC之間，用減壓干法裝柱，鋪層緊密均勻，層析帶分布集中整齊，同時薄層層析的最佳分離溶劑系統可以直接用于低壓柱層析，它是一種分離效果較好，設備簡單，操作方便，快速的方法。適宜和于天然產物的常量制備性分離。
（1）裝柱 減壓干法裝法，層析柱規格：柱長30cm，內徑2cm，共裝硅膠約30g（高約22cm）。
（2）拌樣加樣 取漢防已堿約150mg，加少量丙酮熱溶（剛溶為度）用滴管加到1.5g硅膠上，仔細拌勻，水浴上蒸干，碾細，通過一個長頸漏斗小心加在柱頂，輕輕垂直頓擊，待樣品表面平整不拌動時，上面再蓋約1~2cm高的空白硅膠，再加蓋一園形濾紙片，壓緊。
（3）洗脫
先檢查從空壓機至層析柱各閥門管道是否正常，關緊各個閥門，開動空壓機至額定壓力（5.8kg/cm2）待用。用滴管順層析柱柱壁仔細加入少量洗脫劑（環已烷-慚酸乙酯-二乙胺/6：2：0.8），當液面達到一定高度時，再一次加入其余洗脫劑（共約250ml），迅速在柱頂上裝上玻璃標口塞接頭，用鐵夾壓緊（防加壓時接頭沖開），小心開啟空壓機閥門，再開針形閥和空氣過濾減壓器，（注意：壓力過大。玻璃柱會炸，一般2kg是安全的，必要時可戴防護面罩）調動所需壓力，0.6~1.2kg/cm2，約40分鐘后流出，控制流速1ml/分，每10分鐘左右一管，收12~15份，洗脫全過程約3小時。
（4）檢查
各流份分別移入小玻璃蒸發器中，于水浴上濃縮，分別通過TLC檢查，吸附劑：硅膠G，展開劑：環已烷-乙酸乙酯-二乙胺/6：3：1，改良碘化鉍鉀試劑噴霧顯色，以漢防已甲素、乙素為標準品對照，合并相同組分，分別獲得甲、乙素粗品，用丙酮重結晶，測定mp。
鑒定方法
1．衍生物制備
取漢防已甲素0.2g，溶于2ml（丙酮中，滴加苦味酸飽和水溶液至不再折出黃色沉淀為止，抽濾收集沉淀，順次以少量水乙醚洗滌，乙醇重結晶，得漢防已甲素苦味酸鹽，mp 235~242℃（dc）。
2．有機胺堿的TLC
吸附劑：青島海洋化工廠薄層層析硅膠G，用0.3%CMC-Na水液制板，110℃活化1小時。
樣品：分出的漢防已甲素①、乙素②、總堿③
展開劑：環己烷- EtoAc-NHEt2（6：2：1）
顯色劑：改良碘化鉍鉀試劑（展開后用電吹風吹干再噴顯色劑，以免二乙胺干擾）
現象：甲素顯色后呈淡棕色，2小時左右就褪色，而乙素呈棕色，久置不褪色，可幫助其辨認