1、葡萄糖磷酸化
糖酵解第一步反應是由己糖激酶催化葡萄糖的C6被磷酸化，形成6-磷酸葡萄糖。該激酶需要Mg2+離子作為輔助因子，同時消耗一分子ATP，該反應是不可逆反應。
2、6-磷酸葡萄糖異構轉化為6-磷酸果糖
這是一個醛糖-酮糖同分異構化反應，此反應由磷酸己糖異構酶催化醛糖和酮糖的異構轉變，需要Mg2+離子參與，該反應可逆。
3、6-磷酸果糖磷酸化生成1，6-二磷酸果糖
此反應是由磷酸果糖激酶催化6-磷酸果糖磷酸化生成1，6-二磷酸果糖，消耗了第二個ATP分子。
4、1，6-二磷酸果糖裂解
在醛縮酶的作用下，使己糖磷酸1，6-二磷酸果糖C3和C4之間的鍵斷裂，生成一分子3-磷酸甘油醛和一分子磷酸二羥丙酮。
5、3-磷酸甘油醛和磷酸二羥丙酮的相互轉換
3-磷酸甘油醛是酵解下一步反應的底物，所以磷酸二羥丙酮需要在丙糖磷酸異構酶的催化下轉化為3-磷酸甘油醛，才能進一步酵解。
6、3-磷酸甘油醛的氧化
3-磷酸甘油醛在NAD+和H3P04存在下，由3-磷酸甘油醛脫氫酶催化生成1，3-二磷酸甘油酸，這一步是酵解中惟一的氧化反應。
7、1，3-二磷酸甘油酸轉變為3-磷酸甘油酸
在磷酸甘油酸激酶的作用下，將1，3-二磷酸甘油酸高能磷酰基轉給ADP形成ATP和3-磷酸甘油酸。
8、甘油酸-3-磷酸轉變為甘油酸-2-磷酸
在磷酸甘油酸變位酶催化下，甘油酸-3-磷酸分子中C3的磷酸基團轉移到C2上，形成甘油酸-2-磷酸，需要Mg2+離子參與。
9、甘油酸-2-磷酸轉變為磷酸烯醇式丙酮酸
在烯醇化酶催化下，甘油酸-2-磷酸脫水，分子內部能量重新分布而生成磷酸烯醇式丙酮酸烯醇磷酸鍵，這是糖酵解途徑中第二種高能磷酸化合物。
10、丙酮酸的生成
在丙酮酸激酶催化下，磷酸烯醇式丙酮酸分子高能磷酸基團轉移給ADP生成ATP，是糖酵解途徑第二次底物水平磷酸化反應，需要Mg2+和K+參與，反應不可逆。
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