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  • 發布時間:2023-09-11 09:18 原文鏈接: 細胞凍存的操作步驟

    細胞凍存
    1.預先配制凍存液:10 % DMSO + 90%胎牛血清,4℃冰箱保存預冷;
    2.用胰酶對細胞進行消化:倒去培養瓶中的培養基或用槍小心吸去培養板中的培養基,PBS沖洗兩次,用胰酶消化細胞(盡可能溫和);
    3.再次用完全培養液懸浮細胞,將預冷的凍存液加入消化完全的細胞中,用滴管輕輕吹打混勻.
    4.在每支凍存管中加入1ml細胞液,密封后標記凍存細胞名稱和凍存日期.
    5.凍存步驟的細致直接關系到細胞復蘇時的活力,如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過夜,放入液氮罐)最好;或者可以在4℃,2h;然后轉到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐.
    這是我實驗中用的protocol,,10,今天看師兄做的,跟上面那位說的好像有點出入:在加入胰酶消化,然后補充培養基后,師兄先是離心,然后去上清,然后凍存液重懸沉淀,沒有再加培養基,然后4度30min,在-70度冷凍過夜,1,

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