分子量與分子量分布照分子排阻色譜法(通則0514)測定供試品溶液取本品適量,加流動相溶解并稀釋制成每1ml中約含5mg的溶液。對照品溶液取肝素分子量對照品適量,加流動相溶解并稀釋制成每1ml中約含5mg的溶液系統適用性溶液取肝素分子量系統適用性對照品適量,加流動相溶解并稀釋制成每1ml中約含5mg的溶液。色譜條件以親水改性鍵合硅膠為填充劑(TSK預柱6mm×40mm, TSKgel C4000sWXL,7.8mm×300mm,TSKgel G3000WXL,7.8mm×300mm,串聯使用);以0.1mol/L醋酸銨溶液為流動相;流速為每分鐘0.6ml;柱溫為30℃;示差折光檢測器;進樣體積25μl系統適用性要求系統適用性溶液色譜圖中,主峰與溶劑峰能夠徹底洗脫,重均分子量應在標示值±500范圍內。測定法取對照品溶液,注入液相色譜儀,記錄色譜圖。準確計算對照品溶液色譜圖中肝素峰的總面積(不包括鹽峰)及每個點的累積峰面積百分比,確定與肝素分子量對照品附帶的寬分布標樣表中累積峰面積百分比最接近點的保留時間及對應的分子量,以保留時間為橫坐標,分子量的對數值為縱坐標,使用GPC軟件,擬合三次方程,建立校正曲線,相關系數應不小于0.990。另取供試品溶液,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,按下式計算本品的重均分子量Mw=∑(RIM1)/∑RI式中RI1為洗脫的i級分的物質量,即示差色譜圖的峰高;M;為由校正曲線計算得出的i級分的分子量限度重均分子量應為15000~19000,分子量大于24000的級分不得大于20%,分子量8000~16000的級分與分子量16000~24000的級分比應不小于1.0總氮量取本品,照氮測定法(通則0704第二法)測定,按干燥品計算,本品總氮(N)含量應為1.3%~2.5%。酸堿度取本品0.10g,加水10ml溶解后,依法測定(通則0631),pH值應為5.0~8.0。溶液的澄清度與顏色取本品0.50g,加水10ml溶解后,溶液應澄清無色;如顯渾濁,照紫外可見分光光度法(通則0401),在640nm的波長處測定吸光度,不得過0.018;如顯色,與黃色1號標準比色液(通則0901第一法)比較,不得更深。核酸取本品,精密稱定,加水溶解并定量稀釋制成每1ml中約含4mg的溶液,照紫外可見分光光度法(通則0401),在260m的波長處測定吸光度,不得過0.10。蛋白質照蛋白質含量測定法(通則0731第二法)測定供試品溶液取本品適量,精密稱定,加水溶解并定量稀釋制成每1ml中約含30mg的溶液。對照品溶液取牛血清白蛋白對照品適量,精密稱定,分別加水溶解并定量稀釋制成每1ml中各約含0、10μg、20pg30g、40g與50g的溶液。限度按干燥品計算,含蛋白質不得過0.5%。有關物質照高效液相色譜法(通則0512)測定。供試品溶液取本品適量,精密稱定,加水溶解并定量稀釋制成每1m中約含100mg的溶液,渦旋混合至完全溶解,精密量取0.5ml1,加1mol/L鹽酸溶液0.25ml與25%亞硝酸鈉溶液0.05ml,振搖混勻,反應40分鐘,加1mol/L氫氧化鈉溶液0.2ml終止反應。對照品溶液(1)取肝素對照品0.25g,精密稱定,精密加水2ml,渦旋混勻至完全溶解對照品溶液(2)精密量取對照品溶液(1)1.2ml,加2%硫酸皮膚素對照品0.15ml與2%多硫酸軟骨素對照品 0.15ml 對照品溶液(3)取對照品溶液(2)0.1ml,用水稀釋至1ml對照品溶液(4)取對照品溶液(1)0.4ml,加水0.1ml, 混勻,加1mol/L鹽酸溶液0.25ml與25%亞硝酸鈉溶液0.05ml,振搖混勻,反應40分鐘,加1mol/L氫氧化鈉溶液0.2m終止反應對照品溶液(5)精密量取對照品溶液(2)0.5ml,加1mol/鹽酸溶液0.25m和25%亞硝酸鈉溶液0.05ml,振搖混勻,反應40分鐘,加1mol/L氫氧化鈉溶液0.2ml終止反應色譜條件以烷醇季銨為功能基的乙基乙烯基苯-二乙烯基苯聚合物樹脂為填充劑(AS11-HC陰離子交換柱,2mm×250mm,與AG11-HC保護柱,2mm×50mm,或其他適宜的色譜柱);以0.04%磷酸二氫鈉溶液(用磷酸調節pH值至3.0,0.45μm濾膜過濾,臨用前脫氣)為流動相A,以高氯酸鈉-磷酸鹽溶液(取高氯酸鈉140g,用0.04%磷酸二氫鈉溶液溶解并稀釋至100mnl,用磷酸調節pH值至3.0,0.45μm濾膜過濾,臨用前脫氣)為流動相B,按下表進行線性梯度洗脫;流速為每分鐘0.22ml;檢測波長為202nm;進樣體積20μl。時間(分鐘)流動相A(%)流動相B(%)0~1075~025~10035~40100系統適用性要求對照品溶液(4)色譜圖中應不出現肝素峰,對照品溶液(5)色譜圖中硫酸皮膚素與多硫酸軟骨素色譜峰的分離度不得小于3.0。測定法精密量取供試品溶液,注入液相色譜儀,記錄色譜圖。限度供試品溶液色譜圖中硫酸皮膚素的峰面積不得大于對照品溶液(5)中硫酸皮膚素的峰面積(2.0%);除硫酸皮膚素峰外,不得出現其他色譜峰殘留溶劑照殘留溶劑測定法(通則0861第二法)測定內標溶液稱取正丙醇適量,用水定量稀釋制成每1ml中約含80g的溶液。供試品溶液取本品約2.0g,精密稱定,置10ml量瓶中,加內標溶液溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密量取3ml,置預先加有氯化鈉0.5g的頂空瓶中,密封。對照品溶液取甲醇、乙醇、丙酮適量,精密稱定,用內標溶液定量稀釋制成每1ml中約含甲醇4004g、乙醇400g與丙酮80μg的混合溶液,精密量取3ml,置預先加有氯化鈉0.5g的頂空瓶中,密封。色譜條件釆用6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷(或極性相似)為固定液的毛細管柱為色譜柱;起始溫度為40℃,維持4分鐘,以每分鐘3℃的速率升溫至58℃,再以每分鐘20℃的速率升溫至160℃;進樣口溫度為160℃;檢測器溫度為250℃;頂空瓶平衡溫度為90℃,平衡時間為20分鐘系統適用性要求對照品溶液色譜圖中,出峰順序依次為甲醇、乙醇、丙酮、正丙醇,相鄰各色譜峰間分離度均應符合規定測定法取供試品溶液與對照品溶液分別頂空進樣,記 錄色譜圖限度按內標法以峰面積計算,甲醇、乙醇與丙酮的殘留量均應符合規定。干燥失重取本品,置五氧化二磷干燥器內,在60℃減壓干燥至恒重,減失重量不得過5.0%(通則0831)熾灼殘渣取本品0.50g,依法檢查(通則0841),遺留殘渣應為28.0%~41.0%。鈉照原子吸收分光光度法(通則0406第一法)測定。鹽酸溶液0.1mol/L鹽酸溶液(每1m中含氯化銫27mg)。供試品溶液取本品約50mg,精密稱定,置100ml量瓶中,加鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度,搖勻對照品溶液精密量取鈉單元素標準溶液(每1ml中含200μg),用鹽酸溶液分別定量稀釋制成每1ml中約含鈉5g、50g、75g的溶液測定法在330nm的波長處分別測定各對照品溶液和供試品溶液的吸光度。限度按干燥品計算,含鈉(Na)應為10.5%~13.5%。重金屬取熾灼殘渣項下遺留的殘渣,依法檢查(通則0821第二法),含重金屬不得過百萬分之三十。細菌內毒素取本品,依法檢查(通則1143),每1單位肝素中含內毒素的量應小于0.010EU。