材料：DMEM培養基(Gibco BRL Co生產)， 無糖DMEM培養基(Gibco BRL Co生產)，NRKSIE 鼠。腎小管細胞株(購于華西醫科大學內科實驗室)，乳 酸鈉(國產分析純試劑)。
方法 腎小管細胞培養 NRKSIE鼠腎小管細胞 用0．25% 胰蛋白酶消化，將小管細胞分離成單個細胞懸液，用含100 mL/L 胎牛血清的DMEM培養基，于37℃5%(體積分數)CO2 孵箱中培養。每 24 h更換培養液一次，培養2～3 d，待細胞生長成片備用。
實驗 將細胞轉種于96孑L板，細胞密度 為lO ·mL ，孵育24 h。培養液中加入 H 20 2，濃度為5mmol/L ，作用 30 min。
討論：
腎小管氧化性損傷在腎臟的缺血一再灌注損傷和中 毒性損傷中起著重要作用。為了從細胞水平闡明活 性氧自由基對。腎小管細胞的作用，本實驗用5 mmol/L H2 0 2建立了腎小管氧化性損傷模型。H2 0 2雖 不是自由基，但它屬活性氧類，有高反應性，可促進自 由基的生成，引發生物膜的脂質過氧化反應，導致細 胞的壞死和凋亡。一般情況下，生物體內H 20 2常 被酶系統所清除，如過氧化氫酶和谷胱甘肽過氧化物酶。在過氧化氫復制的腎小管氧化性損傷的模型中， 細胞的損傷非常明顯，表現為細胞存活率降低，細胞 膜完整性破壞，LDH釋放增加，線粒體腫大，溶解明 顯增多，數目減少，細胞的脂質過氧化產物MDA含 量增高。利用培養。腎小管細胞復制氧化性損傷模型 避免了全身神經體液、激素水平及局部不同類型細胞間的相互影響，為更深入地從細胞水平研究。腎臟疾患提供了良好的模型。但由于實驗所用的腎小管細胞 株，在體外培養的過程，其膜表面結構、細胞器(如線粒體)、酶活性等與原代培養的人腎小管細胞可能存 在一些差異，且該模型不能從血流動力學的角度反 映。腎小管細胞的功能。因此，培養的腎小管細胞氧化 性損傷模型必須與在體模型結合起來，相互補充。
扫码下载分析测试百科网APP
