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  • 發布時間:2022-03-28 13:49 原文鏈接: 脂肪酶的活性測定

    方法:

    ⒈粗酶液的制備

    用電子天平分別稱取粗脂肪酶0.010 g、0.020 g 和0.030 g, 用蒸餾水溶解并定容至100 mL, 配成濃度分別為0.01%、0.02% 和0.03%的粗酶液。

    ⒉實驗設計

    本實驗以10 mL色拉油為底物,以酶用量、水解溫度、反應時間為因素,通過酸價的測定選定其水解的最佳條件。

    ⒊酸價的測定

    酸價是指中和1 mol游離脂肪酸所需NaOH的毫克數, 它用于衡量油脂的水解程度。實驗中用酸堿滴定法測定水解液的酸價, 參照文獻[ 3, 4 ]中所使用的方法, 向所得的水解液滴加1 mL 95%的乙醇溶液, 搖勻, 終止反應, 并加入2滴酚酞指示劑, 迅速用0.05 mol/L的NaOH溶液滴定至溶液呈微紅色, 在30 s內不消失為終點, 記錄消耗的NaOH溶液毫升數(V)。用同樣的方法測定空白值, 每個試驗重復兩次, 以平均值作為測定結果。

    酸價按下式計算:

    X = C (V - V0) ×40 /M

    式中: X —油脂酸價(mgNaOH /g油)

    C—NaOH標準溶液的濃度(mol/L)

    M —試樣的質量(g)

    40—NaOH的mmol質量(mg/mmol)

    4 粗脂肪酶活力的測定

    在最佳水解條件下, 分別測得粗脂肪酶和標準脂肪酶水解液的酸價X1、X2 , 根據公式U1 /U= X1 / X2求得粗脂肪酶的活力, 其中U1為粗脂肪酶活力, U為標準脂肪酶活力。

    5標準脂肪酶液的配制

    根據實驗最佳條件, 配制標準脂肪酶液。一篇相關文獻 粗脂肪酶活力的測定方法的研究.pdf

    答:實驗設計,本實驗以10 mL色拉油為底物,以酶用量、水解溫度、反應時間為因素,通過酸價的測定選定其水解的最佳條件。用色拉油作底物不太妥,一般是用橄欖油,化學純的。


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