脂肪酶的測定實驗

酶樣品

氯化鈉 氯化鈣 牛血清蛋白 牛磺膽酸鈉 橄欖油-阿拉伯樹膠乳膠 脂肪酶 NaOH

自動滴定器

實驗混合物：

5 ml 橄欖油-阿拉伯樹膠乳膠

5 ml H₂O

2 m l 3.0 mol/L NaCl

1 ml 0.075 mol/L 氯化鈣

2 ml 0.5％BSA（酵母脂肪酶）或 0.027 mol/L 牛磺膽酸鈉（豬脂肪酶）

15 ml，調至 pH 8.0

空白對照：記錄約 3 min 內，每次自動滴定器加入的滴定標準液的量。

樣品：在實驗混合物中加入合適量的稀釋酶（根據活性），并記錄約 5 min 內，每次自動滴定器加入的滴定標準液的量。

計算：

25℃、pH 8.0 時，從乳化的橄欖油中，每分鐘一個單位釋放出 1 umol 脂肪酸。

試劑：

3.0 mol/L 氯化鈉（NaCl，Mr＝58.4；17.5 g 溶于 100 ml 水中）

0.075 mol/L 氯化鈣（CaCl₂·6H₂O；Mr＝219.1；1.62 g 溶于 100 ml 水中）

0.005 mol/L 氯化鈣（稀釋 0.075 mol/L 氯化鈣溶液 15 倍）。

0.5％ 牛血清蛋白（BSA，酵母脂肪酶）

0.027 mol/L 牛磺膽酸鈉（豬脂肪酶，Mr＝537.7；1.45 g 溶于 100 ml 水中）

橄欖油-阿拉伯樹膠乳膠。溶解 16.5 g 阿拉伯樹膠于 130 ml 水中，補充至 165 ml。加入 20 ml 橄欖油和 15 g 碎冰，低速攪拌直到乳濁液形成。用玻璃絨過濾。

脂肪酶（儲存溶液：每毫升 5 mmol/L 氯化鈣溶解 1 mg，實驗中再稀釋于 5 mmol/L 氯化鈣中）

0.01 mol/L NaOH 標準溶液作為滴定劑，加入自動滴定器的滴管中。