腦脊液有形成分檢查（顯微鏡檢查法）

1. 實驗原理

在顯微鏡下對腦脊液有形成分進行計數和分類檢查。

2. 標本采集：

2.1 標本種類：腦脊液，由臨床醫師進行腰椎穿刺采集，必要時可從小腦延腦池或側腦室穿刺獲得。

2.2 標本要求：將腦脊液分別收集于3個無菌試管中，第一管作細菌培養，第二管作化學分析和免疫學檢查，第三管作一般性狀及顯微鏡檢查。每管收集1-2毫升。

2.3 遇高蛋白標本時可采用EDTA K2抗凝。

3. 標本儲存：立即送檢。

4. 標本運輸：室溫運輸。

5. 標本拒收標準：污染，久置標本。

6. 實驗材料：

細胞計數板；紅細胞稀釋液；瑞氏血細胞染色液，生產廠家：（臺資）珠海貝索生物技術有限公司。

7. 實驗儀器：

7.1 儀器名稱： OLYMPUS 顯微鏡

7.2 儀器廠家：OLYMPUS

7.3 儀器型號：OLYMPUS CH30

8. 操作步驟

8.1 細胞總數

8.1.1 對澄清的腦脊液可混勻后用滴管直接滴入計數池，計數10個大方格內紅、白細胞數，其總和即為每μl的細胞數。再換算成每升腦脊液中的細胞數。如細胞較多，可計數一大格內的細胞×10，即得每μl腦脊液中細胞總數。如用升表示，則再乘以10⁶。也可用生理鹽水或紅細胞稀釋液稀釋后再用人工計數，或直接用血細胞分析儀進行計數。

8.1.2

渾濁或帶血的腦脊液可用血紅蛋白吸管吸取混勻的腦脊液20μl，加入含紅細胞稀釋液0.38ml的小試管內，混勻后滴入計數池內，用低倍鏡計數4個大方格中的細胞總數，乘以50，即為每μl腦脊液的細胞總數。

8.2 白細胞數

8.2.1 非血性標本：小試管內放入冰乙酸1-2滴，轉動試管，使內壁沾有冰乙酸后傾去之，然后滴加混勻的腦脊液3-4滴，數分鐘后，混勻充入計數池，按細胞總數操作中的紅、白細胞計數法計數。

8.2.2 血性標本：將混勻的腦脊液用1%冰乙酸溶液稀釋后進行計數。為剔除因出血而來的白細胞數，用下式進行校正。

每μl腦脊液內白細胞校正數

                                 每μl腦脊液內紅細胞數×每μl腦脊液內白細胞數

=每μl腦脊液內白細胞未校正數－

                                            每μl血液內紅細胞數

例示：血液內紅細胞4 000 000/μl

；

腦脊液內紅細胞20 000/μl；

血液內白細胞10 000/μl；

腦脊液內白細胞60/μl

          20 000×10 000

則：60－                 =60-50=10

            4 000 000

即該患者腦脊液內白細胞之校正數為10。

8.3 細胞分類

8.3.1 直接分類法：白細胞計數后，將低倍鏡換為高倍鏡，直接在高倍鏡下根據細胞核的形態分別計數單個核細胞（包括淋巴細胞及單核細胞）和多核細胞，應數100個白細胞，并以百分率表示。若白細胞少于100個，應直接寫出單核、多核細胞的具體數字。

8.3.2 染色分類法：如直接分類不易區分細胞時，可將腦脊液離心沉淀，取沉淀物2滴，加正常血清1滴，推片制成均勻薄膜，置室溫或37℃溫箱內待干，進行瑞氏染色后用油鏡分類。

如見有不能分類的細胞，應另行描述報告，如腦膜白血病或腫瘤時。

8.4 寄生蟲學檢查：經沉淀涂片認真尋找蟲卵、幼蟲等。

8.  結果判斷與分析

9.   質量控制：進行室內工作人員比對分析，要求差異在10％以內。

10.  參考范圍

11.1 成人腦脊液內無紅細胞，白細胞極少，其參考范圍：

腰池中為（0-10）×10⁶/L；腦室內為（0-5）×10⁶/L；

兒童為（0-15）×10⁶/L，新生兒為（0-30）×10⁶/L。

如白細胞達（10-50）×10⁶/L為輕度增加，（50-100）×10⁶/L為中度增加，200×10⁶/L以上顯著增加。

11.2 正常腦脊液中白細胞主要為單個核細胞，多為淋巴細胞及大單核細胞，兩者之比約為7：3，偶見內皮細胞：軟腦膜和蛛網膜細胞、室管膜細胞、脈絡膜細胞等。

11.  臨床意義

12.1 中樞神經系統感染性疾病時腦脊液根據細胞病理學變化分三個不同時期：①急性炎性滲出期，呈粒細胞反應；②亞急性增殖期，呈激活淋巴細胞或單核-巨噬細胞反應；③修復期呈淋巴細胞反應。化膿性腦膜炎的急性期變化最突出，持續時間最長；此期腦脊液細胞數每微升可高達數千，以中性粒細胞為主，當用抗生素治療后，腦脊液細胞數迅速下降。梅毒性腦炎亞急性期出現較早，持續時間較長，腦脊液中細胞數輕度增加，以淋巴細胞為主，在單純皰疹病毒性腦炎的腦脊液淋巴樣細胞中可發現胞質內包涵體，結核性腦膜炎時其腦脊液細胞數可增加，但超過500×10⁶/L者較為罕見，在發病初期以中性粒細胞為主，但很快下降，由于患者多在發病數天后才來診治，因此首次腰穿時，腦脊液中中性粒細胞已趨下降而淋巴細胞為多。粒細胞、淋巴及漿細胞同時存在是結核性腦膜炎的特點。新型隱球菌性腦膜炎可在腦脊液中直接發現隱球菌，必要時用印度墨汁染色予以確診。

12.2 中樞神經系統腫瘤腦脊液細胞總數可正常或稍高，以淋巴細胞為主。腦脊液中能否找到腫瘤細胞取決于腫瘤位置及惡性程度、穿刺部位和采集標本的多少。同時也與檢查者技術水平有關，采用細胞正玻片離心沉淀儀可提高檢出率。腦脊液找到白血病細胞是白血病腦膜轉移的證據。

12.3 腦血管病腦脊液細胞學檢查有助于鑒別腦出血或腰穿損傷性出血。前者在早期病后數小時可見大量紅細胞和明顯中性粒細胞增多，2-3天內達高峰，在腦脊液中可發現吞噬細胞，出血后數小時至第3天可出現含有紅細胞的吞噬細胞，5天后可見含鐵血黃素吞噬細胞。如為穿刺損傷性出血則不會有上述反應。

12.4 腦寄生蟲病不僅腦脊液細胞數升高，并可見嗜酸性粒細胞增多，約占白細胞的60%或更高。漿細胞增多為另一特點。如將腦脊液離心沉淀物全傾倒在玻片上，在顯微鏡下檢查可發現血吸蟲卵、阿米巴原蟲、弓形體、旋毛蟲的幼蟲等，甚至還可找至細粒棘球絳蟲的頭節或頭鉤。