熒光法測定水中的微量硒

一、方法要點

硒是人體必需元素，大骨節病、克山病生于水、糧食中含硒極低的環境。因此，需要準確可靠的測定方法，本法可準確測定硒低于0．05μg／L。

二、試劑與儀器

(1)鹽酸羥胺：1％溶液。

(2)氯化銨：25％溶液。

(3)EDTA-2，Na鹽：0．1mol／L溶液。

(4)氯化鈣：3％溶液。

(5)甲酚紅指示劑(0．2％)：稱取0．2g甲酚紅溶解于少量蒸餾水中，加2滴氨水(1+1)，用蒸餾水稀至100mL。

(6)2，3-二氨基萘(DAN)：稱取DAN 0．2g于盛有．200mL 0．1mol／L鹽酸的具塞錐形瓶中，置康氏振蕩機上振搖30min，用2號砂芯漏斗過濾，用10mL環己烷反復萃取4次，貯棕色瓶中，置冰箱保存(暗室配制)。若放久，用前再用環己烷萃取一次。

(7)硒標準溶液：準確稱取100mg金屬硒粉于100mL燒杯中，蓋一表面皿，小心地加入5mL濃HNO₃。稍加熱溶解，用蒸餾水定容至1000mL容量瓶中，此溶液濃度為100μg／mL。再用0．1mol/L鹽酸配成0．05μg/mL的硒標準溶液。

(8)FP-550型熒光分光光度計。

三、分析步驟

將水樣用微孔濾膜(0．45μm)或慢速定量濾紙過濾。測定所用水樣的體積按其含硒量而異：含硒約1μg／L時，取水樣100mL；0．5μg／L時，取200mL，直接放入250mL具塞錐形瓶；含硒量在0．2μg／L以下時，取500mL，放入500mL燒杯中，加甲基橙指示劑2滴，用0．1mol／L鹽酸調至橙紅色(已酸化水樣，用0．1mol／L NaOH調至橙紅色)并過量2mL，加2．5mL氯化鈣溶液，再加0．1mol/L KMnO₄ 3滴，置砂浴上蒸發，紫色消失應再加KMnO₄。始終保持溶液呈紫紅色，若有MnO₂沉淀出現，并不妨礙測定，當水樣體積蒸至150mL左右，移入250mL具塞錐形瓶，然后用少許蒸餾水沖洗，并借帶塑膠頭的玻棒擦洗燒杯壁數次。再加5mL 0．1mol/L NaOH(用廣泛pH試紙檢查，溶液pH值應在8以上)。繼續蒸發至約3mL。取下放涼。沿瓶壁周圍加6mL濃鹽酸和10mL氯化銨溶液。置沸水浴上加熱(10±0．5)min，將錐形瓶取下加20mL蒸餾水、5mLEDTA和2mL鹽酸羥胺，后加甲酚紅指示劑1滴，用氨水(1+1)調節至由紫紅色變成橙黃色，即pH值約為1．5。

然后在暗室內加4mL DAN，搖勻，置沸水浴上加熱7min，取下放入冷水中稍冷，加5mL環己烷，置康氏振蕩機上振搖4min，靜置數分鐘。傾入分液漏斗中分液，將有機相移入5mL具塞試管。與水樣測定相同，取等體積蒸餾水4份，兩份作空白，兩份加硒標準液0．05μg或0.1μg，進行測定。激發波長380nm，熒光波長520nm，比色皿厚為1cm。

結果計算：
標準Se(μg)
—————————
標準值一空白值
Se(μg/L)=(樣品值一空白值)———————————×1000

四、注意事項

Se6+還原至Se4+的鹽酸濃度必須在4mol／L以上，將Se6+定量還原至Se4+。