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  • 發布時間:2023-02-13 15:11 原文鏈接: “熒光素,熒光素酶,能態,基態”是什么意思

    免疫熒光法
    免疫熒光法的基本原理是將已知的抗體或抗原分子標記上熒光素,當與其相對應的抗原或抗體起反應時,在形成的復合物上就帶有一定量的熒光素,在熒光顯微鏡下就可以看見發出熒光的抗原抗體結合部位,檢測出抗原或抗體。常用的熒光素有①異硫氰酸熒光素(fluorecein isothiocyante,FITC),為黃色、橙黃色或褐黃色結晶粉末,有兩種異構體,易溶于水和酒精等溶劑。分子量為389,最大吸收光譜為490~495,最大發射光譜為520~530urn,呈現明亮的黃綠色熒光,是最常用的標記抗體的熒光素。②四甲基異氰酸羅達明(tetrametrylrhodarnine isothiocyante,TRITC)是一種紫紅色粉末,較穩定,是羅達明(rhodamine)的衍生物。最大吸收光譜550urn,最大發射光譜620urn呈橙紅色熒光,與FITC發射的黃綠色熒光對比鮮明,常用于雙標記染色。
    按照抗原抗體反應的結合步聚,免疫熒光法可分為以下三種。
    1.直接法
    用熒光素標記的特異性抗體直接與相應的抗原結合,以檢查出相應的抗原成分。
    2.間接法
    先用特異性抗體與相應的抗原結合,洗去未結合的抗體,再用熒光素標記的抗特異性抗體(間接熒光抗體)與特異性抗體相結合,形成抗原一特異性抗體一間接熒光抗體的復合物。在此復合物上帶有比直接法更多的熒光抗體,所以,此法較直接法靈敏。
    3.補體法
    用特異性的抗體和補體的混合液與標本上的抗原反應,補體就結合在抗原抗體復合物上,再用抗補體的熒光抗體與之相結合,就形成了抗原一抗體一補體一抗補體熒光抗體的復合物。熒光顯微鏡下所見到的發出熒光的部分即是抗原所在的部位。補體法具有敏感性強的優勢,同時適用于各種不同種屬來源的特異性抗體的標記顯示,在各種不同種屬動物抗體的檢測上為最常用的技術方法

    熒光素酶(英文名稱:Luciferase)是自然界中能夠產生生物熒光的酶的統稱,其中最有代表性的是一種學名為Photinus pyralis的螢火蟲體內的熒光素酶。在相應化學反應中,熒光的產生是來自于螢光素的氧化,有些情況下反應體系中也包括三磷酸腺苷(ATP)。沒有熒光素酶的情況下,螢光素與氧氣反應的速率非常慢,而鈣離子的存在常常可以進一步加速反應(與肌肉收縮的情況相似)。[1]熒光生成反應通常分為以下兩步:

    螢光素 + ATP → 螢光素化腺苷酸(luciferyl adenylate) + PPi
    螢光素化腺苷酸 + O2 → 氧熒光素 + AMP + 光
    這一反應非常節省能量,幾乎所有輸入反應的能量都被轉化為光。與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈,只有越10%的能量被轉化為光,剩余的能量都變為熱能而被浪費。

    熒光素或熒光素酶不是特定的分子,而是對于所有能夠產生熒光的底物和其對應的酶的統稱,雖然它們各不相同。不同的能夠控制發光的生物體用不同的熒光素酶來催化不同的發光反應。最為人所知的發光生物是螢火蟲,而其所采用不同的熒光素酶與其他發光生物如熒光菇(發光類臍菇,Omphalotus olearius)或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲中,發光反應所需的氧氣是從被稱為腹部氣管(abdominal trachea)的管道中輸入。一些生物,如叩頭蟲,含有多種不同的熒光素酶,能夠催化同一熒光素底物,而發出不同顏色的熒光。螢火蟲有2000多種,而叩甲總科(包括螢火蟲、叩頭蟲和相關昆蟲)則有更多,因此它們的熒光素酶對于分子系統學研究很有用。目前研究得最透徹的熒光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲(Photinus pyralis)。

    能態就是物質所處的不同能級狀態,
    基態就是能量最低的能態

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