葡萄糖氧化酶的制備提純方法

發酵法生產檸檬酸和葡萄糖酸的廢菌絲富含葡萄糖氧化酶,是工業生產葡萄糖氧化酶的理想資源。對工業廢菌絲的處理還可以減輕由其造成的環境污染。有研究表明,用葡萄糖酸發酵的工業廢菌絲生產葡萄糖氧化酶,通過有機溶劑沉淀聚乙二醇二次沉淀、羥基磷灰石柱色譜分離,可得到比活性超過190Ｕ/ｍｇ蛋白的產品-葡萄糖氧化酶。由于黑曲霉或青霉在產生葡萄糖氧化酶的同時還常伴有過氧化氫酶(主要)、α-淀粉酶、蔗糖酶和其他蛋白質的產生,因此有必要首先對葡萄糖氧化酶進行提純,以除去雜蛋白。常用純化方法如下:

1沉淀法

選擇適宜沉淀劑濃度通過分級沉淀或一步沉淀可將葡萄糖氧化酶和其他蛋白質初步分開。沉淀操作需在低溫下進行,因為葡萄糖氧化酶在室溫下對某些沉淀劑不穩定易失活。

2吸附法

吸附材料的吸附機理是在一定條件下,吸附材料的活性基團與葡萄糖氧化酶通過疏水相互作用而被吸附,然后通過改變緩沖液的濃度和ｐＨ值而改變吸附材料中活性基團的電離狀態使葡萄糖氧化酶與吸附劑解吸。

3離子交換法

葡萄糖氧化酶的等電點在49左右,而過氧化氫酶的等電點在65附近。因此在提純葡萄糖氧化酶時應選用陰離子交換劑,且在ｐＨ值大于49時上樣和淋洗,此時葡萄糖氧化酶帶負電荷,可被陰離子交換劑吸附留柱,而過氧化氫酶帶正電荷隨淋洗液流下,從而使二者得以分離,最后用ｐＨ值小于4.2的緩沖液洗柱,使葡萄糖氧化酶帶正電荷而從柱上被洗脫。