蛋白質組和磷酸化蛋白質組聯合分析慢性腎病并...（一）

蛋白質組和磷酸化蛋白質組聯合分析慢性腎病并發高血壓的病理機制

慢性腎病病人一般會出現很多的并發癥，其中大多數腎損傷晚期病人都患有嚴重的高血壓。鹽是慢性腎病和高血壓發病的主要致病因素之一，但其中的病理機制仍然不清楚。本文利用蛋白質組和磷酸化蛋白質組聯合分析的技術，對慢性腎病并發高血壓的病理機制進行了全面系統性的分析。

Proteomic and phosphoproteomic analysis of renal cortex in asalt-load rat model of advanced kidney damage , Scientific Reports , IF=5.228

樣本來源

雄性大鼠（Male Sprague-Dawley rat）腎皮質組織

研究技術

 iTRAQ蛋白質組+iTRAQ磷酸化蛋白質組

研究結果

1、首先是對腎切除（5/6Nx group）大鼠的生理參數進行了檢測，發現切除大鼠的收縮壓，血清肌酐和尿蛋白顯著增加；鹽負荷處理2周后，切除大鼠腎重體重比和收縮壓明顯增加，尿鈉和尿蛋白也顯著升高。

Table 1. Physiological and metabolic parametersin sham and 5/6Nx rats at week 12 after surgery.

2、采用iTRAQ蛋白質組分析腎損傷處理以及鹽負荷處理對腎皮質中蛋白質組的影響，共檢測到2695條肽段；其中與模擬對照組（Sham + NS）相比，腎損傷組（5/6Nx + HS）中318個蛋白表達發生變化，164個上調，154個下調；與正常鹽處理組（5/6Nx + HS）相比（腎損傷處理后），高鹽負荷（5/6Nx + NS）引起310個蛋白差異表達，157個增加，153個降低。

Table 2. List of proteins significantly differentially expressedat least 1.5-fold corresponding to peptides identified by LC-MS/MS analysis ofrenal cortex samples from both 5/6Nx and sham rats fed normal or high saltdiet.

3、利用iTRAQ磷酸化蛋白質組學技術共鑒定到1911個磷酸化肽段，其中1810個（對應550個磷酸化蛋白）有定量數據；之后對這些磷酸化肽段以及磷酸化位點進行了特征分析：肽段磷酸化位點數量以及磷酸化修飾的氨基酸殘基。

Figure 1. Characterization of phosphopeptides and phosphositesat the Log2 (5/6Nx + NS)/(Sham + NS) or Log2(5/6Nx + HS)/(5/6Nx + NS) ratio in(5/6Nx + NS)/(Sham + NS) and (5/6Nx + HS)/(5/6Nx + NS) comparison groups.

4、進一步分析發現：其中與模擬對照組相比，腎損傷組中197個肽段的磷酸化修飾發生變化，113個上調，84個下調；與正常鹽處理組相比（腎損傷處理后），高鹽負荷引起169個肽段的磷酸化修飾發生變化（78個增加，91個降低）；之后對鑒定到的差異磷酸化蛋白功能進行了生物信息學注釋（GO功能分析），發現這些磷酸化修飾改變的蛋白都是很重要的轉運蛋白，細胞結構組分以及受體等。