融合蛋白化學降解實驗3

融合蛋白

天冬氨酸脯氨酸甲酸乙酸鹽酸胍

電泳儀離心機水浴鍋

1.  進行預實驗確定最佳的水解條件。準備四個反應混合物：

（1）反應1：20 μg 溶解在70%甲酸中的融合蛋白。

（2）反應2：20 μg 溶解在70%甲酸/6 mol/l 鹽酸胍中的融合蛋白。

（3）反應3：20 μg 溶解在13%乙酸中的融合蛋白。

（4）反應4：20 μg 溶解在13%乙酸/6 mol/l 鹽酸胍中的融合蛋白。

（5）將所有樣本置37℃下溫育反應。
 

2.  分別在0、24、48和72 h 的反應時刻，從各反應混合物中取5 μl 凍干。

3.  將凍干的蛋白重懸于20 μl 1×SDS樣品緩沖液，逐滴加入0.1 mol/l Tris 堿中和至樣品顏色由黃變藍。用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析樣品的消化程度。

4.  選擇達到預定裂解程度的最溫和條件及最短溫育反應時間，據此按比例擴大反應以裂解更大量的融合蛋白。