血細胞分析儀五分類檢測技術及原理

　　血細胞分析儀是醫院臨床檢驗應用非常廣泛的儀器之一，隨著科學技術日新月異的發展，血細胞分析的技術也從幾年前的三分類轉向現在的五分類，從二維空間進而轉向三維空間，同時現代血細胞分析儀的五分類技術許多采用了先進的技術，如鞘流技術、激光技術等。下面就五分類血細胞分析儀器的檢測方法及其應用加以說明。

　　1 采用阻抗、激光散射和熒光染色技術檢測法

　　直流電阻抗法（DC）用于測量細胞體積大小。激光散射產生的前向散射光、側向散射光和側向熒光可用于探測白細胞體積大小、細胞內含物的情況（細胞核以及顆粒情況），側向熒光則可以反映細胞內脫氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）的含量，特有的嗜酸性粒細胞檢測溶血劑Str-matolyzer-EO可將除了嗜酸細胞以外的所有細胞溶解或萎縮，含有完整嗜酸細胞的液體通過小孔可以按照電阻法計數技術進行計數。在嗜堿細胞通道中，使用特殊溶血劑Strmatolyzer-BA可將除了嗜堿細胞以外的所有細胞溶解或萎縮，含有完整嗜堿細胞的液體通過小孔可以按照電阻法計數技術進行計數。幼稚細胞檢查通道（IMI）可以根據幼稚細胞膜比成熟細胞膜表面含有脂質較少的現象，在細胞稀釋懸液中加入硫化氨基酸，由于占位不同，結合在幼稚細胞表面的氨基酸較多，對溶血劑有抵抗作用，當加入溶血劑后成熟細胞易被溶解，而幼稚細胞不易被破壞，可通過電阻法檢測出來。綜合各個測量方法，得到白細胞五分類的圖形和數據。這種技術主要應用在Sysmex研制和開發的SE-9000、SE-9500、XE-2100、XT-1800等系列血液分析儀中。

　　2 電阻抗和射頻電導聯合檢測法

　　這種方法是分別采用四個檢測系統來檢測不同類型的細胞:（1）淋巴細胞、單核細胞和中性粒細胞檢測系統:在細胞懸浮液中加入溶血劑使紅細胞溶解，而使白細胞保持完整，細胞漿及核形態近似于生理狀態，當這些細胞通過檢測系統時，對白細胞進行電阻抗法（測量細胞體積）和射頻電導法（檢測細胞核和顆粒密度）的聯合檢測，結果將細胞分成淋巴細胞、單核細胞和中性粒細胞三個群體。（2）嗜酸性細胞和嗜堿性細胞兩種檢測系統:在細胞懸浮液中加入特殊的溶血劑，除嗜酸性細胞和嗜堿性細胞外，其他細胞均被溶解或萎縮，再對保持完整的嗜酸性細胞或嗜堿性細胞進行計數。（3）幼稚細胞檢測系統:在細胞懸浮液中加入硫化氨基酸，由于占位不同，結合在幼稚細胞的氨基酸比成熟細胞多，且對溶血劑有抵抗作用，當加入溶血劑時，成熟細胞被溶解，只保留著可能存在的幼稚細胞用來計數。目前日本東亞公司的NE1500、SYSNEX公司的SE9000血細胞分析儀就是采用這種方法進行五分類的。

　　3 多角度激光偏振光散射檢測法

　　采用這種技術的儀器使用鞘流液將標本血稀釋，稀釋后白細胞的內部結構近似于自然狀態，只有嗜堿性細胞由于其吸濕的特性而使細胞結構有輕微改變。紅細胞內的血紅蛋白在高滲透壓的作用下，從細胞中分離出來。而鞘流的水份則進入紅細胞內，使細胞膜結構仍然完整，它與鞘流的折光系數相同，不影響白細胞的檢測。儀器同時從四個角度來檢測通過激光束的細胞所產生的散射光，0°前角散射光用來測定細胞的體積，10°狹角散射光用來測定細胞結構，90°垂直散射光對細胞內部顆粒及細胞質進行測量，90°消偏振光散射將嗜酸性細胞從中性粒細胞和其它細胞中分離出來。利用上述方法進行五分類的儀器，最終結果均呈現在高分辨率的白細胞分布圖上。運用計算機圖像技術，以各種彩色像素代表一定的細胞濃度，使細胞亞群和異常情況易于識別，可以從三維空間的不同方位觀察分離的白細胞亞群。通過某種操作，使三維軸旋轉，就可展示不同方位的細胞分布情況。

　　4 采用圖像分析的單純細胞檢測法

　　該技術采用圖像分析法，將血片染色，用含有掃描鏡頭的顯微鏡掃描每個視野，將獲取的細胞圖像與儀器內存儲的標準圖像進行對照分析，判斷該細胞的類型。此類儀器需要大型的計算機系統支持，由于在當時電子計算機圖形識別和分析技術還不很發達，因此該類設備發展收到一定程度的限制，分析速度慢，在細胞判斷的準確性上也不盡人意，沒有流行起來。現代的計算機圖形圖像分析技術，由于電子計算機運算速度的飛速發展，已經有了很大的進步，如果能繼續開發此類設備，因為其具有非常直觀性，與人對細胞的判斷分析方法非常接近，應當大有前途。