讀懂流式細胞術

流式細胞術，顧名思義，是研究細胞的一種技術，但是它的研究對象絕對不僅僅局限于真核細胞，還可以研究細菌、病毒以及各種蛋白等等。無論你是基礎科研工作者還是臨床醫生，你都用得上這項技術。

自1974年BD公司和斯坦福大學聯合研制出世界上第一臺商用流式細胞儀以來，作為集N個學科的智慧于一身，將計算機技術、電子工程、數學、光學、流體力學和有機化學等學科巧妙融合起來而誕生的這臺儀器—流式細胞儀在免疫學、細胞生物學、發育生物學、細胞動力學、生理學、分子生物學等生物學和醫學研究的各個領域得到了廣泛的應用。

這一技術不僅僅為科研、臨床及教學等不同領域的研究工作提供了強有力的工具，而且為醫療和農牧業生產等應用領域提供了及其重要的支持。接下來讓解螺旋帶大家一起來學習一下，流式細胞術是個什么東東？它能做什么？以及，怎么做？
   
首先我們來瞻仰一下老祖宗們通過思想火花的碰撞以及孜孜以求互相借鑒最后化繭成蝶孕育了流式細胞儀的艱難歷程：

從此流式細胞術的發展就狂奔在了康莊大道上，應用可謂遍地開花。

接下來，我們來一起學習一下流式細胞儀的工作原理：在一定的壓力下，鞘液帶著細胞或者微粒通過噴嘴中心進入到流式照射室，在流式照射室的分析點，激光照射細胞并發生散射和折射，發射出散射光，同時被熒光標記的顆粒發射出熒光。散射光和熒光分別被不同的檢測器接收，通過光電倍增管將檢測到的熒光信號轉換成電信號，這些電信號放大后再經過數據化處理輸入電腦，供我們進行分析。原理如下，一圖讀懂流式細胞儀：

了解了流式細胞儀的原理，最最重要的是，對不同專業不同背景的我們來說，流式細胞術，到底能干什么呢？

第一、流式細胞術可以用來檢測細胞表面以及胞內的各種標志，對細胞進行分群鑒定以及各種蛋白表達量高低的比較。比如CD3是T細胞的標志、CD19是B細胞的標志、EpCAM是上皮細胞的標志等。不僅僅是免疫細胞，其他的如腫瘤細胞、成纖維細胞、干細胞等都可以用流式細胞術進行檢測。實體組織只要經過處理后制成單細胞懸液也能用流式細胞術進行分析和分選。如果你是一名臨床醫生，想比較不同治療方式的患者預后跟治療方案有什么關系，想通過外周血進行分析的話，流式細胞術可以派上大用場，比如可檢測不同治療方案的患者其外周免疫格局發生了什么變化。

第二、通過標記Ki67、BCL-2、caspases等增殖及凋亡相關基因，流式細胞術可用來檢測細胞的增殖以及凋亡。此外還有CFSE、以及PI-annexin V等染料，可用來進行增殖和凋亡分析，在藥物對腫瘤影響的研究過程中應用廣泛。

第三、流式細胞術可用來分析細胞周期。細胞核DNA含量隨著細胞增殖周期時相的不同而發生變化，用DNA染料進行染色，DNA含量多，熒光信號強，DNA含量少，熒光強度低。通過對細胞瞬間的快速測定，判斷細胞所處的細胞周期時相，并分析群體細胞中處于不同周期時相的細胞比例，以研究細胞的周期，DNA復制和染色體倍性等。在腫瘤學研究中尤其常用，可以此來判斷藥物對腫瘤細胞影響、腫瘤的生長速度與患者預后等。

第四、流式細胞術可用于疾病診斷中病原微生物的檢測，以及環境中飲用水、湖泊、河流、原油中的微生物和海洋微生物檢測等。

第五、流式細胞術還可用于農林畜牧養殖業，如依據DNA含量，用于玉米、向日葵、葡萄等的倍性鑒定，分選X、Y精子以控制家畜性別。

除了以上最常用的幾個方面，還有很多其他的高逼格用法。如流式微球陣列（cytometric bead array）檢測可溶性蛋白，也稱CBA法，通過不同的CBA試劑盒，將捕獲微球包被上不同的抗體，對可溶性蛋白進行檢測，類似于今天的luminex法，對于稀有樣本的檢測具有很大的優勢。與luminex不同的是，它不需要額外購買檢測儀器，只要有流式細胞儀就可以進行檢測。小伙伴們根據自己的需要對這一高大上的技術進一步探索吧！