配制培養基的方法和滅菌小知識

培養基，是指供給微生物、植物或動物（或組織）生長繁殖的，由不同營養物質組合配制而成的營養基質。一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽（包括微量元素）、維生素和水等幾大類物質。培養基既是提供細胞營養和促使細胞增殖的基礎物質，也是細胞生長和繁殖的生存環境。

培養基種類很多，根據配制原料的來源可分為自然培養基、合成培養基、半合成培養基；根據物理狀態可分為固體培養基、液體培養基、半固體培養基；根據培養功能可分為基礎培養基、選擇培養基、加富培養基、鑒別培養基等；根據使用范圍可分為細菌培養基、放線菌培養基、酵母菌培養基、真菌培養基等。

培養基配成后一般需測試并調節pH，還須進行滅菌，通常有高溫滅菌和過濾滅菌。培養基由于富含營養物質，易被污染或變質。配好后不宜久置，zui好現配現用。

培養基制備過程

1.配料

配方換算→在容器中加入少量水（蒸餾水，自然水）→按照配方稱取各種藥品（依次加入）→加足所需水量（一藥一勺，取藥后立即蓋上瓶蓋）。

2.溶解

淀粉溶解：少量冷水調成糊狀。加熱溶解，特別是加有瓊脂的培養基，一定要煮沸，瓊脂的熔解溫度95-97℃ ，且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。

3.調PH

用1N的鹽酸或1N的 NaOH把培養基調節到所要求的值。

4.過濾

濾紙或棉花進行過濾。（有時可以省去） [4]

5.分裝

一般培養基放在三角瓶或試管中滅菌使用。

(1)三角瓶

若作靜置培養，則100ml培養基/250ml的三角瓶，最多不能超過150ml培養基/250ml的

三角瓶，否則滅菌時培養基沸騰容易污染棉塞，造成染菌；若作搖瓶培養，則15-20ml培養基/250ml的三角瓶，保證通氣良好。

(2)試管分裝

液體培養基一般裝4-5ml，約試管的1/4高度；

固體斜面培養基一般裝3-4ml，約試管的1/5高度。

6.包扎

分裝好后，塞上棉塞，在用牛皮紙將棉塞包裹好，防止滅菌時水份進入把棉塞弄濕。

7.滅菌

按配方上要求的溫度、壓力進行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高，營養成分會被破壞，培養

基中的糖、氨基酸會使培養基的顏色變深。

8.擺斜面

滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放，使其凝固成為一個斜面，約占試管長度的1/2。

9.貯存

培養基在30℃下放置一天，無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用

培養基配制好后為什么必須立即滅菌？

大家都知道，培養基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養料。由于微生物具有不同的營養類型，對營養物質的要求也各不相同，加之實驗和研究的目的不同，所以培養基的種類很多，使用的原料也各有差異。為了達到實驗和研究的目的，要按照培養基的配方進行配制。而任何一種培養基一經制成就應及時徹底滅菌，以備純 培養用。一般培養基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌。

發酵過程中，培養基滅菌主要有以下幾個原因：如不滅菌，會使生物反應的基質或產物，因雜菌的消耗而損失，造成生產能力的下降;雜菌也會產生代謝產物，這 就使產物的提取更加困難，造成得率降低，產品質量下降;雜菌大量繁殖后，會改變反應液的pH值，使反應異常;有些雜菌會分解產物，使生產失敗;如果發生噬 菌體污染，生產菌細胞將被裂解，使生產失敗。

培養基滅菌是殺滅培養基中本身的原著菌或在空氣中附著的雜菌,更好的讓目標菌生長(減少雜菌消耗培養基中的營養，而且有些雜菌會抑制你目標菌的生長)。一般人工培養菌基本上是盡可能讓其生長快速或者產生代謝產物,因此就讓其在最適培養基上生長,以減少培養時間與提高經濟效益。