酵母菌和霉菌的形態觀察

一、目的要求
1、觀察酵母菌、老菌的個全形態以及它們之間的區別。
2、學會用水浸法觀察酵母菌和霉菌的技術。
3、了解酵母菌和霉菌細胞的構造和繁殖方式的特點。
二、實驗材料
1、接種針、接種杯、酒精杯、載玻片、蓋玻片、吸管。
2、0.1%美藍液、乳酸-石炭酸液（配方見附錄）。
3、菌種 啤酒酵母、假絲酵母、黑根霉、毛霉、青霉、木霉、曲霉。
三、方法步驟
（一）酵母菌的形態觀察
酵終菌是單細胞真核核微生物，細胞核和細胞質有明顯分化，個體比細菌大得多，有的能形成假菌絲。繁殖方式較復雜，無性繁殖以出芽生殖為主，有性繁殖是通過接合產生子囊孢子。
1、酵母菌的形態與出芽生殖的觀察 在載片上滴一滴蒸餾水，以無菌操作，用接種環挑取少許啤酒酵母置于載片上蒸餾水中，取一塊蓋片，小心地將蓋玻片一端與菌液接觸，然后緩慢地將蓋玻片放下；這樣可避免產生氣泡。先用低倍鏡觀察，再用高倍鏡觀察酵母細胞的形狀、大小、構造、內含物及出芽方式。

2、子囊孢子的觀察 將啤酒酵母接種于麥芽汁液體培養中，于28-30℃培養24小時，連續傳代3-4次，最后轉接到培養子囊孢子的培養基上（也可用肉法蛋白胨培養基）。25-28℃培養3天左右，涂片染色（按芽孢染色法）觀察子囊孢子開關和特點，并注意每一個子囊內的孢子數等。
3、假絲酵母觀察 用劃線法將假絲酵母接種在麥芽汁平板上。在劃線部分加蓋玻于25-30℃培養3天先觀察菌落邊緣，再取下蓋玻片，在顯微鏡下觀察呈樹枝狀分枝的假菌絲細胞的形狀，或將皿蓋打開，直接將培養皿放在載物臺上，在低倍鏡下觀察。
4、酵母菌菌落觀察 取啤酒酵母、假絲酵母、園酵母以三點點植法接種于麥芽汁平板上，于28-30℃墳3天。觀察菌落表面、高度、邊緣、質地和顏色等。

5、酵母菌死活的檢查 在載片上加一滴0.1%美藍，把酵母培養液滴加在美藍液上，加蓋玻片觀察，死細胞為蘭色，活細胞無色。
（二）霉菌形態觀察
霉菌形態比細菌、酵母菌復雜，個體比較大，具有分枝的菌絲體和分化的繁殖器官。在觀察時要注意細胞的大小，菌絲構造和繁殖方式。菌絲體有無隔膜，營養菌絲有無假根，無性孢子是怎樣著生在孢子梗上及有性孢子如何生成。
由于霉菌菌絲較粗大，孢子很容易飛出，如果放在水中觀察時容易收縮變形，所以在制標本時不用水，而用乳酸-石炭酸溶液，使細胞不致變形，并有殺菌作用。
1、取培養有青老、木霉、毛霉、曲霉的平皿，挑取一團菌絲，置于滴有一滴乳酸-石炭酸液的載片上，加蓋玻片，由于霉菌是由菌絲組成的，許多菌絲交錯在一起形成菌絲體。在高倍鏡下觀察菌絲分隔情況，分成孢子著生情況（要求辨認分生孢子子梗、頂囊、小梗及分生孢子）。
2、取一培養有根霉的平皿觀察假根、匍匐枝、孢子囊柄及孢子囊。注意假根著生情況。挑取少量菌絲，置于滴有一滴乳酸-石炭酸液的載玻上，加蓋片。在高倍鏡下觀察孢子囊柄，孢子囊及子囊孢子。
3、取一培養好的各種老菌菌落的平皿，注意觀察菌落形態，表面質地，顏色及背面的特征。注意霉菌菌落與細菌、酵母菌落有何區別？
4、觀察紅曲霉的子囊果、子囊及子囊孢子。
5、觀察犁頭霉的結合孢子、保護絲。
6、觀察白地霉的裂生孢子。