釀酒酵母的LiAc／ssDNA／PEG高效轉化法實驗

DNA

TE 緩沖液 雙蒸水

磁力攪拌器 玻璃燒杯

一、單鏈載體 DNA 的制備

1. 在 100 ml 滅菌 TE 緩沖液中溶解 200 mg 高分子量 DNA，置于磁力攪拌器上劇烈攪拌 2~3 個小時以混勻。

2. 將載體 DNA 溶液分裝成 9 個 10 ml 和 10 個 1 ml 的等份，儲存于 -20℃。

3. 在使用前，將 1 ml 的載體 DNA 煮沸 10 分鐘，并于冰水浴中迅速冷卻。

二、醋酸鋰的制備

1. 在 90 ml 雙蒸水中溶解 10.2 g LiAc。

2. 調節終體積到 100 ml，過濾除菌。

三、PEG 的制備

1. 將 50 g 分子量為 3350 的 PEG 放入 150 ml 的玻璃燒杯中，加入 35 ml 雙蒸去離子水。

2. 用磁力攪拌器攪拌至溶解，大約需要 30 分鐘。

3. 將液體轉移到 100 ml 的量筒中。

4. 用少量雙蒸水洗一下燒杯并加到盛 PEG 的量筒中，使體積恰恰達到 100 ml，通過顛倒充分混勻。

5. 用 0.45 μm 的濾膜過濾除菌，儲存于帶密封蓋的瓶子中。