鏈球菌屬及其檢驗

鏈球菌屬（Streptococcus）細菌，呈鏈狀排列的革蘭陽性球菌，個別種成雙排列。廣泛分布于自然界、人及動物腸道和健康人鼻咽部，大多數不致病，致病菌可引起各種化膿性炎癥、猩紅熱、新生兒敗血癥、細菌性心內膜炎以及風濕熱、腎小球腎炎等超敏反應性疾病。

⒈分類

鏈球菌的分類方法尚未統一。常用下列兩種方法。

⑴根據溶血現象：分為3類。①甲型溶血性鏈球菌（α-hemolytic streptococcus）：菌落周圍有1～2mm寬的草綠色溶血環，稱甲型溶血或α溶血，該類菌又稱草綠色鏈球菌，為條件致病菌。②乙型溶血性鏈球菌（β-hemolytic streptococcus）：菌落周圍有2～4mm寬的透明溶血環，稱乙型溶血或β溶血，該類菌又稱溶血性鏈球菌，致病性強，常引起人和動物多種疾病。③丙型鏈球菌（γ-streptococcus）：菌落周圍無溶血環，因而又稱不溶血性鏈球菌，一般不致病。

⑵根據抗原結構：按鏈球菌細胞壁中多糖抗原不同，可分成A、B、C、D …等20個群。同群鏈球菌間，因表面蛋白質抗原不同又分若干型。如A群根據其M抗原不同，可分成約100個型；B群分4個型。對人致病的鏈球菌菌株，主要是 A群，多數呈現乙型溶血。

⒉細菌特性

⑴鏈球菌

① 形態染色 球形或橢圓形，直徑0.5～1.0μm，鏈狀排列，鏈的長短與細菌的種類和生長環境有關，在液體培養基中形成的鏈較長。無芽胞，無鞭毛。多數菌株在培養早期（2～4h）形成透明質酸的莢膜。革蘭染色陽性。

②分離培養 營養要求較高，培養基中需加入血液或血清、葡萄糖、氨基酸、維生素等物質。多數菌株兼性厭氧，少數為專性厭氧。在液體培養基中呈沉淀生長，在血平板上，37℃18～24h后可形成灰白色、圓形、凸起、光滑、直徑為0.5mm～0.75mm的細小菌落，菌落周圍出現不同類型的溶血環。

③生化反應 觸酶陰性、一般不分解菊糖，不被膽汁溶解，這兩特性可用來鑒別甲型溶血性鏈球菌和肺炎鏈球菌。

④．抗原構造 主要有三種：

蛋白質抗原：或稱表面抗原。具型特異性有M、T、R、S 4種，位于C抗原外層。與致病性有關的是M抗原。

多糖抗原：或稱C抗原。為群特異性抗原，位于細胞壁。根據C抗原的不同，將鏈球菌分為20群。對人致病的90％屬A群。

核蛋白抗原：或稱P抗原。無特異性，為各種鏈球菌所共有，并與葡萄球菌有交叉。

⑤ 抵抗力 不強，60℃30min即被殺死。對常用消毒劑敏感。乙型鏈球菌對青霉素、紅霉素、四環素及磺胺類敏感。

⑵ 肺炎鏈球菌

① 形態染色 革蘭陽性球菌，菌體呈矛頭狀、成雙排列，寬端相對，尖端向外，在膿液、痰液及肺組織病變中亦可呈短鏈狀，無鞭毛，無芽胞，在機體內或含血清的培養基中可形成莢膜。

②分離培養 營養要求高，在血平板上形成灰白色、圓形、直徑為0.5mm～1.0mm的扁平菌落，周圍有草綠色溶血環。培養時間長時可產生自溶酶。

③生化反應 多數菌株分解菊糖，膽鹽溶解試驗陽性和optochin敏感試驗陽性，籍此可與草綠色鏈球菌相區別。

④抗原結構

莢膜多糖抗原 可將肺炎鏈球菌分為85個血清型。肺炎鏈球菌14型與人類A血型抗原有交叉反應。

多糖抗原 為各型菌株所共有。可被血清中一種C反應蛋白（C reactive protein,CRP）所沉淀。正常人血清中只含微量CRP，急性炎癥者含量增高，故常以測定CRP作為診斷的依據。

M蛋白：為型特異抗原，與A群鏈球菌M蛋白類似，但抗原性不同，與毒力無關。

⑤抵抗力 本菌抵抗力弱，對一般消毒劑敏感。有莢膜菌株抗干燥力較強，在干痰中可存活1～2月。對青霉素、紅霉素、潔霉素敏感。

⑥ 變異性 有莢膜的肺炎鏈球菌經人工培養后可發生菌落由光滑型向粗糙型，即S-R變異，同時隨著莢膜的消失，毒力亦隨之減弱。將R型菌落的菌株接種動物或在血清肉湯中培養，則又可恢復S型。

⒊臨床意義

⑴化膿性鏈球菌

A群鏈球菌也稱化膿性鏈球菌（pyogenic streptococcus），致病力強，占人類鏈球菌感染的90%，能產生多種外毒素和侵襲性酶，如鏈球菌溶素O和S、M蛋白、脂磷壁酸、鏈激酶、鏈道酶、透明質酸酶等，可引起急性咽炎、呼吸道感染、丹毒、膿皰病、軟組織感染、心內膜炎、腦膜炎及變態反應性疾病如急性腎小球腎炎、風濕熱等，產毒株還可引起猩紅熱。鏈球菌型別多，各型間無交叉免疫，故常反復感染。

⑵乳鏈球菌

B群鏈球菌學名無乳鏈球菌（S.agalactiae）是新生兒敗血癥和腦膜炎的常見菌，對成人主要引起腎盂腎炎、子宮內膜炎等。

⑶ 肺炎鏈球菌

肺炎鏈球菌（S.pneumoniae），俗稱肺炎球菌（pneumococcus），是大葉性肺炎、支氣管炎的病原菌，還可引起中耳炎、乳突炎、鼻竇炎、腦膜炎等。其莢膜在細菌的侵襲力上有重要作用，此外溶血素、神經氨酸酶是主要致病物質。感染后機體可產生牢固的型特異性免疫。但因菌型多，可再感染其他型。

⑷ 草綠色鏈球菌

草綠色鏈球菌亦稱甲型溶血性鏈球菌。是人體口腔、消化道、女性生殖道的正常菌群，可引起亞急性細菌性心內膜炎。

⒋微生物學檢驗

⑴鏈球菌

檢驗程序

鏈球菌檢驗程序見圖9-2。

 ⑵標本采集 根據不同疾病采集不同標本。

⑶檢驗方法

顯微鏡檢查 標本涂片革蘭染色，鏡檢見鏈狀排列革蘭陽性球菌可初報。

分離培養 血液標本先增菌培養，膿液、咽拭可接種血瓊脂平板并涂片染色鏡檢，初代分離需5％C02，35℃24h觀察菌落性狀。

⑵肺炎鏈球菌

①檢驗程序

肺炎鏈球菌檢驗程序見圖9-3。

②標本采集 根據病變部位采集不同標本。

③檢驗方法

顯微鏡檢查 除血液外，痰、膿液等均可直接涂片染色鏡檢。如發現革蘭陽性矛頭狀雙球菌，周圍有較寬的透明區，經莢膜染色確認后可初報“找到肺炎鏈球菌”。

分離培養：血液、腦脊液先增菌，可呈均勻混濁，有綠色熒光。痰液、膿液可直接接種血平板，5%～10%CO2培養后，取可疑菌落進一步作optochin敏感實驗、膽鹽溶菌試驗與菊糖發酵試驗，以區別于甲型鏈球菌。

動物試驗：小鼠對肺炎鏈球菌敏感，12～36h死亡。

莢膜腫脹試驗：如遇同型免疫血清，則肺炎鏈球菌莢膜出現腫脹，為陽性。

④鑒定與鑒別

β溶血鏈球菌鑒定（表9-1）