鏈球菌的檢驗

引起臨床型乳房炎或者亞臨床型乳房炎的鏈球菌常見的有無乳鏈球菌、停乳鏈球菌以及乳房鏈球菌。

　　1主要試劑和試驗方法

　　CAMP試驗：在血瓊脂平板上用金黃色葡萄球菌培養物劃一條直線，然后將鏈球菌培養物劃一條線，與金黃色葡萄球菌培養物的劃線相互垂直，但不要接觸，二者相距3-5mm，各鏈球菌分離菌劃線間距l0～20mm。置37℃溫箱內培養24h后觀察結果。在兩劃線交界處出現箭頭樣的溶血區為陽性。

　　2乳樣的采集

　　選取出現臨床癥狀（或者懷疑為亞臨床型乳房炎）乳房炎奶牛，先用溫水，再用0.2％新潔爾滅擦洗乳房，最后用70％的酒精擦拭乳頭。采樣者同時進行手指擦拭消毒。每個乳室先擠去頭2～3把奶，以排除污染的雜菌，每頭奶牛取乳樣5mL于無菌乳樣杯中，待檢。

　　3病原菌的分離培養

　　初步診斷：將少量乳汁涂片、革蘭氏染色、鏡檢。如發現圓球形革蘭氏陽性細菌可懷疑為鏈球菌。

　　分離培養：將乳樣搖勻，分別取適量接種于營養肉湯（10％血清）、鮮血瓊脂、麥康凱瓊脂培養基（平板）后，置于37℃溫箱培養24～48h。觀察每個平板中細菌生長的情況，記錄菌落生長表現。

　　普通瓊脂平板上，37℃，24～72h培養后，未見到菌落。

　　鮮血瓊脂平板上長有灰白色、半透明表面光滑圓形隆起的小菌落，出現溶血現象，如果是β溶血則疑為無乳鏈球菌，如果為α溶血，疑為停乳鏈球菌或者乳房鏈球菌，如為γ溶血，則疑為乳房鏈球菌。

　　血清肉湯中生長初呈均勻渾濁，管底出現絮狀沉淀，上清變得透明。

　　挑取典型菌落涂片、染色、鏡檢，鏡檢如呈球狀，短鏈狀或者長鏈狀排列，無芽胞、莢膜，革蘭氏染色陽性則疑為鏈球菌。

　　4生化鑒定

　　鏡檢形態符合鏈球菌特性，且觸酶試驗陰性細菌，即鑒定為鏈球菌屬細菌。若細菌CAMP試驗陽性，不水解七葉苷和馬尿酸鈉，即鑒定為無乳鏈球菌；若細菌CAMP試驗陰性，不水解七葉苷和馬尿酸鈉，即鑒定為停乳鏈球菌；若細菌CAMP試驗陰性，水解七葉苷和馬尿酸鈉，即鑒定為乳房鏈球菌。

　　5動物試驗

　　對實驗動物，只有停乳鏈球菌具有致病性，將其18h血清肉湯培養物0.5mL注入小白鼠腹腔，或給家兔靜脈接種l～2mL，可使動物在1周內死亡。對接種后發病、死亡小鼠（家兔）的肝臟進行病原菌重分離。進行菌落涂片、革蘭氏染色、顯微鏡檢查，觀察所分離菌株是否為原接種菌。如果是則進一步確定病原菌為停乳鏈球菌。其他兩種鏈球菌并不能使試驗動物致死。