霉菌水浸標本片的制備與觀察

（一）實驗目的：學習自制水浸片觀察霉菌的形態

（二）實驗原理：霉菌的營養體是分枝的絲狀體。其個體比細菌和放線菌大得多，分為基內菌絲和氣生菌絲。氣生菌絲中又可分化出繁殖絲。不同霉菌的繁殖菌絲可以形成不同的孢子。

霉菌菌絲較粗大，細胞易收縮變形，且孢子容易飛散，所以制標本時常用乳酸石炭酸棉藍染色液。此染色液制成的霉菌標本片的特點是：細胞不變形，具有殺菌防腐作用，且不易干燥，能保持較長時間，溶液本身呈藍色，有一定染色效果。

利用培養在玻璃紙上的霉菌作為觀察材料，可以得到清晰、完整、保持自然狀態的霉菌形態；也可以直接挑取生長在平板中的霉菌菌體制水浸片觀察。

（三）實驗器材

1.活材料：在馬鈴薯瓊脂平板上或用玻璃紙透析培養法培養3—4天的根霉（Rhizpus sp.）、青霉（Penicillum sp.）、曲霉（Aspergillus sp.）；

2.染色液和試劑：乳酸石炭酸棉藍染色液（附錄二、（一）、10）、50%酒精（V/V）。

3.器材：剪刀、鑷子、載玻片、蓋玻片、解剖針、顯微鏡。

（四）實驗方法

1.制水浸制片觀察法  在載玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉藍染色液或蒸餾水，用解剖針從生長有霉菌的平板中挑取少量帶有孢子的霉菌菌絲，用50%的乙醇浸潤，再用蒸餾水將浸過的菌絲洗一下，然后放入載玻片上的液滴中，仔細地用解剖針將菌絲分散開來。蓋上蓋玻片（勿使產生氣泡，且不要再移動蓋玻片），先用低倍鏡，必要時轉換高倍鏡鏡檢并記錄觀察結果。

2.玻璃紙透析培養觀察法

（1）玻璃紙的選擇與處理  要選擇能夠允許營養物質透過的玻璃紙。也可收集商品包裝用的玻璃紙，加水煮沸，然后用冷水沖洗。經此處理后的玻璃紙若變硬，必定是不可用的，只有那些軟的可用。將那些可用的玻璃紙剪成適當大小，用水浸濕后，夾于舊報紙中，然后一起放入平皿內121℃滅菌30min備用。

（2）菌種的培養    按無菌操作法，倒平板，冷凝后用滅菌的鑷子夾取無菌玻璃紙貼附于平板上，再用接種環沾取少許霉菌孢子，在玻璃紙上方輕輕抖落于紙上。然后將平板置28—30℃下培養3—5天，曲霉菌和青霉菌即可在玻璃紙上長出單個菌落（根霉菌的氣生性強，形成的菌落鋪滿整個平板）。

（3）制片與觀察  剪取玻璃紙透析法培養3—4天后長有菌絲和孢子的玻璃紙一小塊，先放在50%乙醇中浸一下，洗掉脫落下來的孢子，并趕走菌體上的氣泡，然后正面向上貼附于干凈載玻片上，滴加1—2滴乳酸石炭酸棉藍液，小心地蓋上蓋玻片（注意不要產生氣泡），且不要移動蓋玻片，以免搞亂菌絲。

標本片制好后，先用低倍鏡觀察，必要時再換高倍鏡。注意觀察菌絲有無隔膜，有無假根、足細胞等特殊形態的菌絲。注意其無性繁殖器官的形狀和構造，孢子著生的方式和孢子的形態、大小等。

（五）實驗作業：

給出根霉、青霉、曲霉的個體形態圖，并注明各部位名稱。