認識酶的化學本質,了解酶蛋白的共性、催化特性和各種影響催化反應的因素,控制外界條件,對于合理、正確使用食品添加劑酶制劑、防止酶失活,提高催化反應的效率有重要意義。
1.溫度
溫度是影響催化作用的最重要因素之一,在一定條件下,每種酶都有一個最適作用的溫度,在此溫度下酶活力最高,作用效果最好,酶也較穩定,酶催化反應的速度增加和酶活力的熱變性損失達到平衡,這個溫度便是酶作用的最適溫度。每種酶還有一個活性穩定的溫度,在此溫度下在一定的時間、pH和酶濃度下,酶較穩定,不發生或極少發生活力下降,這一溫度為酶的穩定溫度。超過穩定溫度進行作用,酶會急劇失活。酶的這種熱靈敏性,可用臨界失效溫度Tc表示,指酶在1h喪失一半活力的溫度。所以,一般只有在酶的有效溫度范圍內,才能進行有效的催化作用,溫度每升高10℃,酶反應速度增加1~2倍。溫度對酶作用的影響還與其受熱的時間有關,反應時間延長,酶的最適溫度會降低。另外,酶反應的底物濃度、緩沖液種類、激活劑和酶的純度等因素,也會使酶的最適溫度和穩定溫度有所變化。
2.pH值
pH值能改變酶蛋白和底物分子的解離狀態。每種酶僅在較窄的pH范圍內才表現出較高的活力,該pH值即是酶作用的最適pH值。一般來說,酶在最適pH值表現最穩定,因此酶作用的pH值也就是其穩定的pH值。酶反應pH值過高或過低,酶都會受到不可逆的破壞,穩定性、活力下降,甚至失活。不同酶的最適pH范圍不同,偏酸性、中性、偏堿性的都有。比如根據作用最適pH值,常把蛋白酶分為酸性蛋白酶、中性蛋白酶和堿性蛋白酶。酶作用pH值也是一定條件下,測得的參數。溫度或底物不同,酶作用的最適pH不同,溫度越高,酶作用的穩定pH范圍越窄。因此,在酶催化反應過程中,必須嚴格控制反應的 pH值。
3.底物濃度和酶濃度
底物濃度是決定酶催化反應速度的主要因素,在一定的溫度、pH及酶濃度的條件下。底物濃度很低時,酶的催化反應速度隨底物濃度的增加而迅速加快,兩者成正比。隨著底物濃度的增加,反應速度減緩,不再按正比例升高。底物濃度[S]和酶催化反應速度V之間的關系,一般可用米氏方程式表示。有時底物濃度很高,還會因底物抑制作用造成酶反應速度下降。當底物濃度大大超過酶濃度,酶催化反應速度一般與酶濃度成正比。此外,如果酶濃度太低,酶有時會失效,使反應無法進行。在食品加工中所進行的酶催化反應,酶用量一般比底物量少許多,也要考慮酶的成本因素。
4.激活劑
許多物質具有保護和增加酶活性的作用,或者促使無活性的酶蛋白轉變成有活性的酶,這些物質統稱為酶激活劑。激活劑可分為三類:第一類是無機離子,如Na+、K+、Ca2+、、Mg2+、Cu2+、Co2+ 、Zn2+等陽離子,以及Cl-、NO3-、PO43-、SO42-等陰離子。第二類是分子較小的有機物,主要是維生素B族及其衍生物。第三類是具有蛋白質性質的高分子物質。激活劑對酶催化反應速度的影響與底物濃度相似,但在實際生產中應用很少。
抑制劑
許多物質可以減弱、抑制,甚至破壞酶的作用,這些物質稱為酶的抑制劑。如重金屬離子、一氧化碳、硫化氫、有機陽離子、乙二胺和四乙酸等。實際生產中,要了解和避免抑制劑對酶催化作用的影響。
其他許多物理因素對酶的活性有較大影響,甚至使其變性失活。在實際應用中,由于濕度、pH對酶的變性是不可逆的,故應嚴格控制好pH值,一般必須先調節pH,再加入酶,為使用的關鍵點。然后再調節控制溫度及添加適量的金屬離子激活劑,了解酶制劑使用的有關注意事項,避免克服其它因素的不利影響,使酶有適宜的作用條件和環境。
制劑的一般保存方法應根據酶的性質決定,由于酶不太穩定,易受各種因素的影響而失去活力。要使酶長期保存而不失去活性,關鍵在于干燥和低溫。酶制劑水分含量越高,越易失活,故一般粉狀酶制劑易于保存和運輸。熱和光照都易使酶失去活性,因此,酶制劑應密閉儲存在低溫避光處。酶的底物和某些物質具有保護酶的作用,如淀粉對淀粉酶有保護作用,所以往往將淀粉酶吸附在淀粉上保存。有時也可加入對淀粉酶有保護作用的碳酸鈉。此外,還應注意保存容器的材料,因為有些金屬離子也能引起酶失去活性或抑制酶的活力。
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