實驗方法原理 無菌操作從蛋中取出雞胚放入培養皿中。
實驗步驟
材料:
無菌材料
DBSS: 取材用 BSS(含有高濃度抗生素的 BSS,見附錄 I),裝在 25?50 ml 的螺口試管或通用容器內
BSS:50 ml 盛于無菌燒杯中,用于冷卻燒過的器械
20?50 ml 小燒杯或蛋杯
直頭和彎頭鑷子
9 cm 皮氏培養皿
非滅菌材料
孵化 10 天的受精卵
70%乙醇
棉簽
孵箱(非 C02)
操作步驟
1. 在濕潤的環境中于 38.5℃:條件下孵卵,每天轉動 180°,然雞卵孵育也需要 20?21 天,但它們的發育階段不同于鼠胚。分離整個胚胎進行細胞培養,需在大約第 8 天時進行。若分離器官則大約在第 10?13 天(在英國第 10 天是要許可證的最后期限)。
2. 用 70% 乙醉棉簽消毒雞卵,鈍端向上放于小燒杯內(圖 12.4a)。
3. 用無菌鑷打破卵殼(圖 12.4b), 剝離卵殼直到氣旗的邊緣(圖 12.4c)。
4. 重新消毐鑷子后(浸入乙醇,燒干乙形,于無菌的 BSS 屮冷卻)用鑷子剝離白色的殼膜,露下面的絨毛嵌喪膜(CAM)及血管(圖 12.4d、圖 12.4e)
5. 用彎鑷子刺破絨毛尿褒膜(圖 12.4f),輕輕夾住頭部下方,提出胚胎(圖 12.4 g、圖 12.4 h),不要完全閉合鑷子,避免頸部被切斷,將中指墊在鑷子下,用它限制食指的壓力(圖 12.4 g)。
6. 將雞胚放入直徑 9 cm 含 20 ml DBSS 的培養皿中(圖 12.4i),等待進一步解剖和培養(見方案 12.7)。