單抗到底是怎么?產的？

　　單抗到底是怎么生產的？

　　單克隆抗體(MAb)是針對專一的抗原決定簇產生的抗體，單克隆技術?名雜交瘤技術起源于1975年，由G.K?hler和Milstein創立。主要原理是利用產生抗體的B細胞與腫瘤細胞雜交融合成雜交瘤細胞，生產抗體。

　　雜交瘤技術制備單克隆抗是針對體的主要步驟包括：

　　(1)抗原制備；

　　(2)免疫動物；

　　(3)免疫脾細胞和骨髓瘤細胞的制備；

　　(4)細胞融合；

　　(5)雜交瘤細胞的選擇培養；

　　(6)雜交瘤細胞的篩選；

　　(7)雜交瘤細胞的克隆化；

　　(8)單克隆抗體的檢定；

　　(9)分泌單克隆抗體雜交瘤細胞系的建立；

　　(10)單克隆抗體的大量制備。

　　單克隆抗體的制備過程：

　　1、免疫動物

　　免疫動物是用?的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性Balb/c小鼠，按照預先制定的免疫?案進?免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進?外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。

　　2、細胞融合

　　采用眼球摘除放血法處死小鼠，無菌操作取出脾臟，在平?內擠壓研磨，制備脾細胞懸液。將準備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定?例混合，并加?促融合劑聚??醇。在聚??醇作用下，各種淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發生融合，形成雜交瘤細胞。

　　3、選擇性培養

　　選擇性培養的?的是篩選融合的雜交瘤細胞，一般采用HAT選擇性培養基。在HAT培養基中，未融合的骨髓瘤細胞因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶，不能利用補救途徑合成DNA?死亡。 未融合的淋巴細胞雖具有次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶，但其本?不能在體外長期存活也逐漸死亡。只有融合的雜交瘤細胞由于從脾細胞獲得了次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶，并具有骨髓瘤細胞能無限增殖的特性，因此能在HAT培養基中存活和增殖。

　　4、雜交瘤陽性克隆的篩選與克隆化

　　在HAT培養基中生長的雜交瘤細胞，只有少數是分泌預定特異性單克隆抗體的細胞，因此，必須進?篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進?雜交瘤細胞的克隆化培養。采用靈敏、快速、特異的免疫學?法，篩選出能產生所需單克隆抗體的陽性雜交瘤細胞，并進?克隆擴增。經過全?鑒定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白類型、亞類、特異性、親和?、識別抗原的表位及其分?量后，及時進?凍存。

　　5、單克隆抗體的大量制備

　　單克隆抗體的大量制備重要采用動物體內誘生法和體外培養法。

　　(1)體內誘生法 取Balb/c小鼠，?先腹腔注射0.5ml液體?臘或降植烷進?預處理。1-2周后，腹腔內接種雜交瘤細胞。雜交瘤細胞在小鼠腹腔內增殖，并產生和分泌單克隆抗體。約1-2周，可見小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹?，即可獲得大量單克隆抗體。

　　(2)體外培養法 將雜交瘤細胞置于培養瓶中進?培養。在培養過程中，雜交瘤細胞產生并分泌單克隆抗體，收集培養上清液，離?去除細胞及其碎?，即可獲得所需要的單克隆抗體。但這種?法產生的抗體量有限。近年來，各種新型培養技術和裝置不斷出現，大大提?了抗體的生產量。雜交瘤細胞融合后，要進?篩選后才能使用。雜交瘤細胞分為兩次：一、篩選出雜交瘤細胞；?、在初選的雜交瘤細胞中篩選出能產生特異性抗體的雜家瘤細胞，這兩次篩選的?法和原理各不相同。