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1、樣品質量。 所抽取樣品的蛋白含量，蛋白變性是否充分等等，還有，蛋白樣品的PH值是否在7~8之間。這會直接影響到樣品濃縮的效果。此外，蛋白樣品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都會對最終結果的可靠性有影響。 2、凝膠質量。 不連續SDS-PAGE膠對凝膠的要求較高，分離膠的PH值應在8.8左右，而濃縮膠的PH應在6.8左右，最好不要差過0.5個PH單位，因為這個PH條件是保證電泳液中的甘氨酸不電離的必要條件，也是保證能充分壓縮樣品的前提。因此，制備凝膠的時候所用Tris-HCl緩沖液的PH值是否穩定是很重要的。 3、點樣。 樣品盡量不要與電泳液混合，這樣能提高濃縮的效果，因為電泳液PH值為8.3，而樣品為7.5，混合后會影響到樣品的PH值，進而影響濃縮效果。因此，建議點樣最好用**頭，或者加樣器，輕輕的將樣品加到孔的底部。 4、電泳緩沖液。 盡量用新鮮配制的。這樣能保證PH值和離子強度的穩定。 5、電壓條件。......閱讀全文
蛋白質印跡法是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。在實驗過程中有很多要點需要實驗人員注意，小析姐整理了一些，希望對你的實驗能有所幫助。 蛋白質印跡法(免疫印跡試驗)即Western Blot，其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的
1、樣品質量。 所抽取樣品的蛋白含量，蛋白變性是否充分等等，還有，蛋白樣品的PH值是否在7~8之間。這會直接影響到樣品濃縮的效果。此外，蛋白樣品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都會對最終結果的可靠性有影響。 2、凝膠質量。 不連續SDS-PAGE膠對凝膠的要求較高，分離膠的PH值應在8.8
Southern印跡法是將DNA片段從電泳凝膠中轉移至膜支持物上，使DNA片段固定，因此該膜半永久性地重現出凝膠電泳的帶型。實驗方法原理本方案是專門為將瓊脂糖凝膠印跡至不帶電荷或帶正電荷的尼龍膜上而設計的，稍作修改后同樣可用于硝酸纖維素膜方法。實驗材料DNA試劑、試劑盒HClNaClTrisNaOH
值得一提的是，western blot這個名稱的由來很有意思。最開始做印跡工作的是一個叫做Edwin Southern的科學家，但印跡的對象是DNA鏈，他把這種技術稱為Southern blot，后來類似的出現了兩個過程相似，但是對象不同的印跡方法，一個針對RNA，一個針對蛋白質，人們分別把這兩種技
蛋白質印跡法（免疫印跡試驗）即Western Blot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。蛋白質印跡法是由瑞士米歇爾弗雷德里
與Southern Blot或Northern Blot雜交方法類似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附
與Southern Blot或Northern Blot雜交方法類似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附
與Southern Blot或Northern Blot雜交方法類似,但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質,“探針”是抗體,“顯色”用標記的二抗。經過PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質樣品,轉移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附
Western Blot顯色的方法主要有以下幾種： i. 放射自顯影 ii. 底物化學發光ECL iii. 底物熒光ECF iv. 底物DAB呈色 現常用的有底物化學發光ECL和底物DAB呈色，體同水平和實驗條件的是用第一種方法，發表文章通常是用底物化學發光ECL。只要買現成的試劑盒就行
與Southern Blot或Northern Blot雜交方法類似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE（聚丙烯酰胺凝膠電泳）分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附