PPO粗酶液的純化
一、原理1.葡聚糖凝膠SephadexG-200凝膠柱層析利用大分子不能進入凝膠顆粒內部最先流出柱外，而小分子物質進入凝膠顆粒內部，流速慢而最后流出柱外，凝膠層析法能將不同分子大小的物質分離開。（G-200能分離800-80000D分子量的蛋白質）2.利用離子交換法，選取DEAE-陰離子纖維素DE52柱材料，因為PPO是帶有陽離子的蛋白質，在層析時會吸附在柱材料上，而雜蛋白會洗下。后用NaCl梯度洗脫PPO，（NaCl為強離子交換劑，能將弱吸附在柱材料上的PPO置換下來）。粗酶液從而得到純化。二、材料與試劑試劑：0.02MTris-HCL緩沖液Ph7.4(內含0.001MEDTA)配制時配×10倍濃縮液1000ml;NaCL;聚已二醇；DEAE-纖維素DE52；葡聚糖凝膠SephadexG-200;蘭葡萄糖－40、70、100等；實驗器械與儀器設備：試管與試管架、燒杯、玻璃攪棒、移液管、滴管等；試劑瓶、層析柱、pH計和pH試紙、......閱讀全文
PPO粗酶液的純化
實驗概要本實驗利用葡聚糖凝膠柱層析對PPO粗酶液進行了純化。實驗原理1. 葡聚糖凝膠SephadexG-200凝膠柱層析利用大分子不能進入凝膠顆粒內部最先流出柱外，而小分子物質進入凝膠顆粒內部，流速慢而最后流出柱外，凝膠層析法能將不同分子大小的物質分離開。(G-200能分離800-80000D分子量
PPO粗酶液的純化
實驗材料 葡聚糖凝膠SephadexG-200干粉試劑、試劑盒 Tris-HCL緩沖液NaCL聚已二醇DEAE-纖維素DE52儀器、耗材 試管試管架燒杯玻璃攪棒移液管滴管試劑瓶層析柱pH計恒流泵梯度混合儀核酸蛋白監測儀GL-20C高速冷凍離心機DL-7A大容量低速冷凍離心機
PPO粗酶液的純化
一、原理1.葡聚糖凝膠Sephadex G-200凝膠柱層析 利用大分子不能進入凝膠顆粒內部 最先流出柱外，而小分子物質進入凝膠顆粒內部，流速慢而最后流出柱外，凝膠層析法能將不同分子大小的物質分離開。（G-200能分離800-80000D分子量的蛋白質）2.利用離子交換法，選取DEAE-陰離子纖維素
PPO粗酶液的純化
一、原理1.葡聚糖凝膠SephadexG-200凝膠柱層析利用大分子不能進入凝膠顆粒內部最先流出柱外，而小分子物質進入凝膠顆粒內部，流速慢而最后流出柱外，凝膠層析法能將不同分子大小的物質分離開。（G-200能分離800-80000D分子量的蛋白質）2.利用離子交換法，選取DEAE-陰離子纖維素DE5
PPO粗酶液的純化
凝膠層析法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 葡聚糖凝膠SephadexG-200凝膠柱層析利用大分子不能進入凝膠顆粒內部最先流出柱外，而小分子物質進入凝膠顆粒內部，流速慢而最后
PPO粗酶液的純化——凝膠層析法
實驗方法原理葡聚糖凝膠SephadexG-200凝膠柱層析利用大分子不能進入凝膠顆粒內部最先流出柱外，而小分子物質進入凝膠顆粒內部，流速慢而最后流出柱外，將不同分子大小的物質分離開。（G-200能分離800-80000D分子量的蛋白質）。實驗材料PPO粗酶液試劑、試劑盒Tris-HCL緩沖液NaCL
酶液的純化方法
酶是蛋白質，因此凡用于蛋白質的純化手段均適用于酶的純化，如鹽析法、聚乙二醇沉淀法、有機浴劑分級沉淀法、等電點法、選擇性沉淀法、各種柱層析法（吸附層析、離子交換層析、凝膠過濾）、各種電泳法及親和層析等。不同之處是酶的純化過程尚需選用迅速簡便的活力測定方法，以追蹤酶的去向。在選用酶的活力測定方法時，分析
PPO活性測定
一、原理與方法PPO催化各種酚與O2氧化為醌。本實驗是采用鄰苯二酚為底物，在0.2M磷酸氫二鈉－0.1M檸檬酸緩沖液PH5.8的反應體系中，PPO催化鄰苯二酚形成褐色的醌，在分光光度計410nm處使反應體系的OD值產生變化，通過OD值上升的讀數變化確定PPO的酶活大小。其方法是：在含有4mlPH5.
PPO活性測定
一、原理與方法PPO催化各種酚與O2氧化為醌。本實驗是采用鄰苯二酚為底物，在0.2M磷酸氫二鈉－0.1M檸檬酸緩沖液PH5.8的反應體系中，PPO催化鄰苯二酚形成褐色的醌，在分光光度計410nm處使反應體系的OD值產生變化，通過OD值上升的讀數變化確定PPO的酶活大小。其方法是：在含有4mlPH5.
PPO活性測定
一、原理與方法PPO催化各種酚與O2氧化為醌。本實驗是采用鄰苯二酚為底物，在0.2M磷酸氫二鈉－0.1M檸檬酸緩沖液PH5.8的反應體系中，PPO催化鄰苯二酚形成褐色的醌，在分光光度計410nm處使反應體系的OD值產生變化，通過OD值上升的讀數變化確定PPO的酶活大小。其方法是：在含有4mlPH5.
多酚氧化酶（PPO）的分離提取
一、原理與目的多酚氧化酶是植物組織內廣泛存在的一種含銅氧化酶，植物受到機械損傷和病菌侵染后，PPO催化酚與O2氧化形成醌，是組織形成褐變，以便損傷恢復，防止或減少感染，提高抗病能力。醌類物質對微生物有毒害作用，所以傷口醌類物質出現是植物防止傷口感染的愈傷反應，因而受傷組織一般這種酶的活性就會提高。多
PPO活性測定
分光光度法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 PPO催化各種酚與O2氧化為醌。本實驗是采用鄰苯二酚為底物，在0.2M磷酸氫二鈉－0.1M檸檬酸緩沖液PH5.8的反應體系中，PPO
PPO活性測定——分光光度法
PPO活性測定可應用于：（1）研究PPO生理機制與調節。（2）了解酶的活性與植物組織褐變以及生理活動之間的關系。實驗方法原理PPO催化各種酚與O2氧化為醌。本實驗是采用鄰苯二酚為底物，在0.2M磷酸氫二鈉－0.1M檸檬酸緩沖液PH5.8的反應體系中，PPO催化鄰苯二酚形成褐色的醌，在分光光度計410
酶的純化方法
在食品加工過程中使用的酶究竟要達到怎樣的純度主要取決于這樣的考慮：一種酶制劑是否含有其他的酶或組分。一種食品級酶制劑必須符合食品法規，但不要求是純酶，它可以含有其他的雜酶，當然還含有各種非酶的組分。這些雜酶和非酶組分對于食品加工可能會帶來有益的或有害的作用。例如，用于澄清果汁的果膠酶往往是從霉菌粗提
酶的純化介紹
在食品加工過程中使用的酶究竟要達到怎樣的純度主要取決于這樣的考慮：一種酶制劑是否含有其他的酶或組分。一種食品級酶制劑必須符合食品法規，但不要求是純酶，它可以含有其他的雜酶，當然還含有各種非酶的組分。這些雜酶和非酶組分對于食品加工可能會帶來有益的或有害的作用。例如，用于澄清果汁的果膠酶往往是從霉菌粗提
酶的分離純化步驟
酶的分離純化一般包括三個基本步驟： 即抽提、 純化、 結晶或制劑。首先將所需的酶從原料中引入溶液， 此時不可避免地夾帶著一些雜質， 然后再將此酶從溶液中選擇性地分離出來， 或者從此溶液中選擇性地除去雜質， 然后制成純化的酶。
大腸桿菌亮氨酞tRNA合成酶的E292對氨基酞化活性的作用
實驗試劑1. L-Leucine，ATP，DTT，焦磷酸鈉(tetrasodium pyrophosphate)和HA-Ultrogel購自美國Sigma公司。2. [32p]-焦磷酸鈉購自美國杜邦公司。3. L-[I4C]-亮氨酸和DEAE-SepharoseTM Fast Flow購自英國Ame
大腸桿菌亮氨酞tRNA合成酶的E292對氨基酞化活性的作用
實驗概要本研究通過基因點突變的方法，將大腸桿菌亮氨酞-tRNA合成酶(leucyl-tRNA synthetase, LeuRS)的E292用不同性質的6種氨基酸替換，這些氨基酸包括K(帶正電荷的氨基酸)，F(芳香族氨基酸)，S(親水性小分子氨基酸)，D(比E少一個亞甲基一CH2一的氨基酸)
酶的提取和分離純化
(一)細胞破碎處理 許多酶都存在于細胞內。為了提取這些胞內酶，首先需要對細胞進行破碎處理。細胞破碎的方法很多，主要包括機械破碎法、物理破碎法、化學破碎法和酶學破碎法等。機械破碎法是指利用搗碎機、研磨器或勻漿器等將細胞破碎。物理破碎法是指利用溫度差、壓力差或超聲波等將細胞破碎。化學破碎法是指利用
酶的提取和分離純化
(一)細胞破碎處理 許多酶都存在于細胞內。為了提取這些胞內酶，首先需要對細胞進行破碎處理。細胞破碎的方法很多，主要包括機械破碎法、物理破碎法、化學破碎法和酶學破碎法等。機械破碎法是指利用搗碎機、研磨器或勻漿器等將細胞破碎。物理破碎法是指利用溫度差、壓力差或超聲波等將細胞破碎。化學破碎法是指
親和層析純化胰酶
一、實驗目的與原理生物大分子化合物的重要特征之一是具有與某些相對應的分子通過次級鍵或共價鍵專一結合的能力即親和力。例如酶與抑制劑之間，抗原與抗體之間，結合的雙方不僅是專一的，而且結合以后可以在不喪失生物活性的基礎上用物理或化學的方法進行解離。根據這一特性，如果把具有親和力的一對分子的某一方連接于水不
酶的純化與活力測定
在酶學和酶工程的生產和研究中，經常需要進行酶活力的測定，以確定酶量的多少以及變化情況。酶活力測定是在一定條件下測定酶所催化的反應速度。在外界條件相同的情況下，反應速度越大，意味著酶的活力越高。1 酶活力測定的方法酶活力測定的方法很多，如化學測定法、光學測定法、氣體測定法等。酶活力測定均包括兩個階段：
常用果膠酶純化方法
常用果膠酶純化方法有：硫酸銨沉淀、丙酮沉淀、離子交換層析以及凝膠過濾色譜等。
酶的提取和分離純化
(一)細胞破碎處理 許多酶都存在于細胞內。為了提取這些胞內酶，首先需要對細胞進行破碎處理。細胞破碎的方法很多，主要包括機械破碎法、物理破碎法、化學破碎法和酶學破碎法等。機械破碎法是指利用搗碎機、研磨器或勻漿器等將細胞破碎。物理破碎法是指利用溫度差、壓力差或超聲波等將細胞破碎。化學破碎法
胰蛋白酶(trypsin）純化
［原理］胰蛋白酶與另外兩種蛋白水解酶：糜蛋白酶（胰凝乳蛋白酶）和彈性蛋白酶同時存在于胰臟中。由于胰蛋白酶、糜蛋白酶和彈性蛋白酶的酶蛋白分子在結構上及其它很多性質上的相似之處，往往在一般的制備過程中很難將它們彼此徹底分開，傳統的分離、純化技術難以達到十分滿意的結果，但采用親和層析技術，大大提高了分離純
酶的分離純化方法簡介
酶的分離純化方法簡介生物細胞產生的酶有兩類：一類由細胞內產生后分泌到細胞外進行作用的酶，稱為細胞外酶。這類酶大都是水解酶，如酶法生產葡萄糖所用的兩種淀粉酶，就是由枯草桿菌和根酶發酵過程中分泌的。這類酶一般含量較高，容易得到；另一類酶在細胞內產生后并不分泌到細胞外，而在細胞內起催化作用，稱為細胞內酶，
酶的純化與活力測定
酶的純化與活力測定在酶學和酶工程的生產和研究中，經常需要進行酶活力的測定，以確定酶量的多少以及變化情況。酶活力測定是在一定條件下測定酶所催化的反應速度。在外界條件相同的情況下，反應速度越大，意味著酶的活力越高。1 酶活力測定的方法酶活力測定的方法很多，如化學測定法、光學測定法、氣體測定法等。酶活力測
?酶的純化與酶的固定化技術介紹
酶的純化酶的純化屬于一種后處理工藝，包括粗制工藝與精制工藝，對超酶液進行濃縮精制是生產高質量酶制劑的重要環節。其提純手段一般是依據酶的分析大小、形狀、電荷性質、溶解度、專一結合位點等性質而建立。要得到純酶,一般需要將各種方法聯合使用。最常用的純化方法有根據溶解度特性的沉淀法;根據電荷極性的離子交換層
植物PPO的研究現狀及展望
PPO與抗病性的關系人們已進行了廣泛的研究[32]。植物在抵御病原微生物的侵染過程中，抗性相關酶發揮了重要作用，這主要包括了酚類代謝系統中的一些酶和病原相關蛋白家族PPO通過催化木質素及醌類化合物形成，構成保護性屏蔽而使細胞免受病菌的侵害，也可以通過形成醌類物質直接發揮抗病作用。目前已比較成功的
紫外可見分光光度計檢測多酚氧化酶酶活性
多酚氧化酶（PPO）是一類由核基因編碼在細胞質中合成的含銅質體的金屬酶，其作用機理在于銅的氧化-還原作用。大麥中的多酚物質經過PPO的催化氧化后，具有單寧性質，易和蛋白質起交聯作用而沉淀出來，進而影響啤酒的色澤、泡沫、風味和非生物穩定性。大麥中部分PPO以“潛伏”狀態存在，在浸麥過程中，可通過去除一