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實驗材料 cDNA試劑、試劑盒 BHI氯霉素NaOHSSC氯仿異戊醇TESSDSmRNA甲硫氨酸乙醇乙酸鈉免疫沉淀緩沖液儀器、耗材 轉子硝酸纖維濾膜離心管微量多孔洗滌儀實驗步驟 1. 往微量滴定板的每孔中加入250 μl 含適當抗生素的選擇性BHI培養液，并分別接種獨立的cDNA克隆，37℃溫育過夜。2. 在250 ml 燒瓶中加入50 ml BHI/抗生素培養液，以10個克隆過夜培養液為一組， 從每個微孔中取100 μl 培養液，混合后接種到燒瓶中。3. 37℃培養至A590=0.7，然后加入氯霉素繼續于37℃溫育過夜；對每組10個過夜的克隆重復培養。4. 2 000 g 4℃離心10 min，制備質粒DNA。 5. 將制得的約50 μg 質粒DNA溶于1.5 ml TE緩沖液中，移入15 ml無菌、帶蓋的玻璃培養管中。6. 沸水浴1......閱讀全文
3.2 免 疫 B 細胞的制備血清效價有意義(>1 : 1000)的免疫后動物可以提供抗原反應性B 細胞用于融合。這些細胞可以從脾臟或淋巴結中獲得。動物用吸人CO2 處死，在無菌操作下取組織，放 在 4°C無血清培養基中，最多可放lh 。用懾子或針頭輕輕打開組織脾臟或淋巴結的外包膜獲得
在典型的免疫篩選實驗中，λ噬菌體表達載體構建的文庫應鋪在不含異丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG) 的大腸桿菌菌株的平板上。誘導物的缺少保證了噬菌斑順利形成前不產生對宿主有毒性的融合蛋白，2~4 h 后，將平板從 42°C 移到 37°C 以穩定溫度敏感型的所有融合蛋白。本實驗來源于分子克隆實驗指
檢測結合抗體的方法有以下 3 種：放射化學篩選，生色反應篩選及化學發光反應篩選。3 種方法的優缺點在本章導言中有所論述。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒封閉緩沖液氯仿裂解緩沖液檢測抗原-抗體復合物所用試劑SMTNT 緩沖液洗滌緩
試劑、試劑盒 封閉緩沖液 氯仿 裂解緩沖液 檢測抗原-抗體復合物所用試劑 SM T
基本實驗步驟 （1）收獲細胞，加入適量細胞IP裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑），冰上或者4℃裂解30min, 12,000g離心30 min后取上清； （2） 取少量裂解液以備Western blot分析，剩余裂解液將1μg相應的抗體和10-50 μl protein A
（多克隆抗體）的免疫電泳實驗原理：多克隆抗體的免疫電泳又稱為γ球蛋白電泳或免疫球蛋白電泳技術，這是一種能夠判斷血液中三種免疫球蛋白IgM, IgG, IgA含量水平的實驗方法。在多克隆抗體的免疫電泳驗技術中，首先利用蛋白質的分子量和所帶電荷的比值運用水平瓊脂糖凝膠電泳技術將蛋白質進行分離，然
（多克隆抗體）的免疫電泳實驗原理： 多克隆抗體的免疫電泳又稱為γ球蛋白電泳或免疫球蛋白電泳技術，這是一種能夠判斷血液中三種免疫球蛋白IgM, IgG, IgA含量水平的實驗方法。在多克隆抗體的免疫電泳驗技術中，首先利用蛋白質的分子量和所帶電荷的比值運用水平瓊脂糖凝膠電泳技術將蛋白質進行分離
（多克隆抗體）的免疫電泳實驗原理： 多克隆抗體的免疫電泳又稱為γ球蛋白電泳或免疫球蛋白電泳技術，這是一種能夠判斷血液中三種免疫球蛋白IgM, IgG, IgA含量水平的實驗方法。在多克隆抗體的免疫電泳驗技術中，首先利用蛋白質的分子量和所帶電荷的比值運用水平瓊脂糖凝膠電泳技術將蛋白質進行分離
（多克隆抗體）的免疫電泳實驗原理： 多克隆抗體的免疫電泳又稱為γ球蛋白電泳或免疫球蛋白電泳技術，這是一種能夠判斷血液中三種免疫球蛋白IgM, IgG, IgA含量水平的實驗方法。在多克隆抗體的免疫電泳驗技術中，首先利用蛋白質的分子量和所帶電荷的比值運用水平瓊脂糖凝膠電泳技術將蛋白質進行分離
（多克隆抗體）的免疫電泳實驗原理： 多克隆抗體的免疫電泳又稱為γ球蛋白電泳或免疫球蛋白電泳技術，這是一種能夠判斷血液中三種免疫球蛋白IgM, IgG, IgA含量水平的實驗方法。在多克隆抗體的免疫電泳驗技術中，首先利用蛋白質的分子量和所帶電荷的比值運用水平瓊脂糖凝膠電泳技術將蛋白質進行分離
試劑、試劑盒 封閉緩沖液氯仿裂解緩沖液檢測抗原-抗體復合物所用試劑SMTNT 緩沖液洗滌緩沖液 125I 標記的蛋白質 A 或 125I 標記的免疫球蛋白放射性碘化第二抗體第一抗體LB 或 SOB 瓊脂平板儀器、耗材 空氣培養箱平頭鑷子 裝有防水黑墨水（印度墨水）并帶有 18 號針頭的注射器硝酸纖維
試劑、試劑盒 封閉緩沖液 氯仿 IPTG 抗原-抗體復合物檢測試劑 SM TNT
藥物高通量篩選技術，是發現創新藥物的重要技術手段之一，已受到藥學同行的極大關注。現將近年來藥物高通量篩選技術的研究進展做一綜述。 ■發展中的高通量篩選技術 高通量篩選的組合模式。近年來，由于自動化技術特別是機器人的應用，在新藥研究中出現了高通量篩選技術，該技術將化學、基
藥物高通量篩選（HTS）技術，是發現創新藥物的重要技術手段之一，已受到藥學同行的極大關注。現將近年來藥物高通量篩選技術的研究進展做一綜述。 發展中的高通量篩選技術 高通量篩選的組合模式近年來，由于自動化技術特別是機器人的應用，在新藥研究中出現了高通量篩選技術，該技術將化學、基因組研究、生物信
藥物高通量篩選技術，是發現創新藥物的重要技術手段之一，已受到藥學同行的極大關注。現將近年來藥物高通量篩選技術的研究進展做一綜述。 ■發展中的高通量篩選技術 高通量篩選的組合模式。近年來，由于自動化技術特別是機器人的應用，在新藥研究中出現了高通量篩選技術，該技術將化學、
藥物高通量篩選技術，是發現創新藥物的重要技術手段之一，已受到藥學同行的極大關注。現將近年來藥物高通量篩選技術的研究進展做一綜述。■發展中的高通量篩選技術高通量篩選的組合模式。近年來，由于自動化技術特別是機器人的應用，在新藥研究中出現了高通量篩選技術，該技術將化學、基因組研究、生物信息，以及自動化儀器
近日發表在英國《自然》雜志上的一篇免疫學論文指出，將生活在無菌環境下的實驗小鼠和寵物店的“臟”小鼠混養在一起，它們就能產生與成人類似的免疫功能特征，可用于多種不同疾病的研究。 實驗小鼠是生物醫學研究中使用的主要動物，其免疫系統更像新生嬰兒不成熟的免疫系統，而不是成人的。它們除可用于藥物篩選、毒
自身抗體診斷的標準技術是間接免疫熒光法，其特點是特異性強，陽性與陰性樣品的信號強度對比明顯，通過顯微鏡觀測能夠精確地判斷組織或細胞內熒光的分布。自身抗原的位置決定了其相應抗體的典型的熒光模式，所有與此典型模式不相關區域的染色被認為是非特異性染色。即使偶爾伴有強的
自身抗體診斷的標準技術是間接免疫熒光法，其特點是特異性強，陽性與陰性樣品的信號強度對比明顯，通過顯微鏡觀測能夠精確地判斷組織或細胞內熒光的分布。自身抗原的位置決定了其相應抗體的典型的熒光模式，所有與此典型模式不相關區域的染色被認為是非特異性染色。即使偶爾伴有強的非特異性染色，但弱的特異性信號也能夠被
⒊ 注射抗原 ⑴ 準備兩只成年兔，將100μg抗原/兔溶入1ml磷酸緩沖溶液中待用。在1ml福氏不完全佐劑中加入分枝桿菌制成完全佐劑，并加入1ml抗原溶液，劇烈震蕩使之充分乳化，用3ml注射器抽取該乳化液，接上25G針頭，排除注射器中的氣泡。從籠中取出兔子放在平坦處，在4個不同的部位進
3 免疫策略不同實驗室使用的免疫策略是不同的，很多免疫策略都同樣有效。 目的是擴大宿主體內抗原反應性 B 細胞的數量。體內每次接觸到蛋白質抗原，都會增加抗原反應性B 細胞的數量。在對抗原的再次應答中，產生的抗體量會增加，總的免疫球蛋白類別會從以IgM 為主轉變為以IgG 為主，特異性抗體
動物實驗的基本操作技術實驗動物(experimental animals)是指經過人工飼養、繁育，對其攜帶的微生物及寄生蟲實行控制，遺傳背景明確或者來源清楚，應用于科研、教學、生產和檢定以及其他科學實驗的動物。這些個體具有較好的遺傳均一性、對外來刺激的敏感性和實驗再現性。 一、常用實驗
小鼠（mouse）————學名：mus musculus,在生物分類學上屬脊椎動物門、哺乳動物綱、嚙齒目、鼠科、鼷鼠屬、小家鼠種。小鼠以其高繁殖、易飼養、表達明顯等特點，成為實驗室里常用的實驗動物。以下是幾種常用的實驗小鼠品系。 A、近交系（ired strain）: 1）BALB/c小鼠
一、腫瘤動物模型建立的意義： （1）評價抗腫瘤免疫治療的療效； （2）作為抗腫瘤藥物篩選模型； （3）為腫瘤轉移研究提供更好的研究平臺； （4）為研發抗腫瘤轉移性藥物提供良好的實驗工具。 二、誘發性腫瘤動物模型 實驗方法原理:誘發性腫瘤動物模型是指研究者用化學致癌劑、放射線、致癌病
實驗動物實驗動物(experimental animals)是指經過人工飼養、繁育，對其攜帶的微生物及寄生蟲實行控制，遺傳背景明確或者來源清楚，應用于科研、教學、生產和檢定以及其他科學實驗的動物。這些個體具有較好的遺傳均一性、對外來刺激的敏感性和實驗再現性。一、常用實驗動物的種類和特點（一）狗(do
實驗概要本文介紹了多克隆抗體的免疫電泳操作流程。免疫電泳技術不僅可用于血清或尿樣中單克隆抗體的鑒定，也可用于其它方面，比如免疫復合物的篩選、各種異常丙種球蛋白血癥的識別和鑒定等。免疫電泳技術也是進行蛋白質常規評價的一種可靠，精確的實驗方法，可觀察蛋白質結構的變化和濃度的改變。實驗原理免疫電泳又稱為γ
俞曉峰博士現任賽業模式生物副總裁、高級科學家，負責基因修飾模式動物的研發與技術服務等工作。 俞博士在遺傳基因模式動物領域有超過20年研發與管理等方面的豐富經驗，在干細胞相關領域及哺乳動物細胞系基因改造研究也取得了巨大成就，其研究成果多次發表在Nature Immunology、Hum Mo
俞曉峰博士現任賽業模式生物副總裁、高級科學家，負責基因修飾模式動物的研發與技術服務等工作。 俞博士在遺傳基因模式動物領域有超過20年研發與管理等方面的豐富經驗，在干細胞相關領域及哺乳動物細胞系基因改造研究也取得了巨大成就，其研究成果多次發表在Nature Immunology、Hum Mo
俞曉峰博士現任賽業模式生物副總裁、高級科學家，負責基因修飾模式動物的研發與技術服務等工作。 俞博士在遺傳基因模式動物領域有超過20年研發與管理等方面的豐富經驗，在干細胞相關領域及哺乳動物細胞系基因改造研究也取得了巨大成就，其研究成果多次發表在Nature Immunology、Hum Mo
實驗方法原理 SELEX 技術是一種利用隨機寡核苷酸（DNA 或 RNA）文庫篩選靶分子的特異性配基的組合化學技術。最常用的是隨機 RNA 文庫，因為 RNA 分子中除 G-C、