DNA酶I足跡法對DNA上的蛋白質結合位點作圖實驗

可以DNA結合的酶DNA連接酶

DNA連接酶：是能夠使用來自ATP或NAD的化學能將先前切割或斷裂的DNA鏈聚集在一起的酶。連接酶在DNA滯后鏈復制中特別重要，因為它們將岡崎碎片組合成DNA鏈。連接酶在DNA修復和基因重組中也發揮重要作用。

DNA酶試驗

DNA酶試驗是檢驗技師考試的內容，醫學教育網搜集整理相關內容供大家參考。（1）原理：某些細菌產生DNA酶，可使長鏈DNA水解成寡核苷酸鏈。因為長鏈DNA可被酸沉淀，寡核苷酸鏈則溶于酸，所以當在菌落平板上加入酸后，會在菌落周圍出現透明環。（2）培養基：0.2%DNA瓊脂平板。（3）方法：將被檢菌點種于

DNA酶切

一、 DNA酶切反應?　　1、 將清潔干燥并經滅菌的eppendorf管(最好0.5ml)編號,用微量移液槍分別加入DNA 1μg和相應的限制性內切酶反應10×緩沖液2μl,再加入重蒸水使總體積為19μl,將管內溶液混勻后加入1μl酶液,用手指輕彈管壁使溶液混勻,也可用微量離心機甩一下,使溶

DNA酶試驗

　(1)原理：某些細菌能產生DNA酶，可使長鏈DNA水解成為寡核苷酸鏈。因為長鏈DNA可被酸沉淀，而寡核苷酸則溶于酸。故在DNA瓊脂平板上加鹽酸后，可在菌落周圍形成透明環。　　(2)培養基：0.2%DNA瓊脂平板。　　(3)方法：在DNA瓊脂平板上點種待檢菌，35℃孵育18~24h，用1mol/L鹽

DNA酶切

一、 DNA酶切反應?　　1、 將清潔干燥并經滅菌的eppendorf管(最好0.5ml)編號,用微量移液槍分別加入DNA 1μg和相應的限制性內切酶反應10×緩沖液2μl,再加入重蒸水使總體積為19μl,將管內溶液混勻后加入1μl酶液,用手指輕彈管壁使溶液混勻,也可用微量離心機甩一下,使溶液集中在

DNA的酶切與連接——質粒DNA酶切

DNA的連接和酶切可用于：（1）利用限制性核酸內切酶切割DNA和利用DNA連接酶連接DNA是DNA重組過程中的關鍵步驟之一；（2）成功的酶切和有效的連接為后續的外源基因進入宿主細胞進行表達提供了有效的實驗材料。實驗方法原理限制性內切酶能夠特異性地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附

DNA連接酶(DNA－ligase)介紹

DNA連接酶是1967年在三個實驗室同時發現的。它是一種封閉DNA鏈上缺口酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA鏈的5'-PO4與另一DNA鏈的3'-OH生成磷酸二酯鍵。但這兩條鏈必須是與同一條互補鏈配對結合的(T4DNA連接酶除外)，而且必須是兩條緊鄰DNA鏈才能被DNA

DNA重組（DNA－recombination）技術：工具酶

一、限制性內切酶限制性內切酶（restriction endonucleases，RE）是其中最重要的工具酶之一。它是一類核酸水解酶，能識別和切割雙鏈DNA分子中的特定核苷酸序列。（一）命名原則限制性內切酶大多從細菌中發現，根據來源進行命名，限制酶的第一個字母（大寫，斜體）為宿主菌的屬名，第二、第三

結合DNA的酶

核酸酶和連接酶：核酸酶是能夠切割DNA鏈的酶，因為它們催化磷酸二酯鍵的水解。從位于DNA鏈末端的核苷酸開始水解DNA的核酸酶稱為核酸外切酶。另一方面，直接切入DNA鏈的那些是內切核酸酶。分子生物學中使用最廣泛的核酸酶，稱為限制性內切酶，以切割特定序列的DNA。在自然界中，這種酶通過在進入細菌細胞時消

DNA酶切反應

一、 DNA 酶切反應1、將清潔干燥并經滅菌的eppendorf管(最好0.5ml)編號，用微量移液槍分別加入DNA 1μg和相應的限制性內切酶反應10×緩沖液2μl，再加入重蒸水使總體積為19μl，將管內溶液混勻后加入1μl酶液，用手指輕彈管壁使溶液混勻，也可用微量離心機甩一下，使溶液集中在管

DNA酶的簡介

　　Skaggs 化學生物學院的 Gerald F. Joyce 教授領導的研究組，利用體外演化的方法將RNA 酶轉化成了DNA酶，這將有助于了解有關生命的一個最基本問題，即生命如何由RNA世界演化為今天的以DNA和蛋白質為基礎的細胞形式。　　新研究顯示RNA酶要轉化成具有同等功能的為 DNA酶，僅

DNA聚合酶及DNA連接酶的功能和區別

DNA聚合酶，以已有的核酸序列作為模板，將4種脫氧核苷酸（A、T、G、C）按照模板的堿基排列順序，以“堿基互補原則”依次連接，聚合成為一條新的DNA鏈。 DNA連接酶，是將DNA片段上的缺刻連接起來的酶。? ? 一、DNA聚合酶? ? （一）DNA聚合酶I?? ? DNA聚合酶I（DNA pol

可以DNA結合的酶核酸酶

可以DNA結合的酶聚合酶

聚合酶：聚合酶是從核苷三磷酸合成多核苷酸鏈的酶。它們通過向鏈上存在的先前核苷酸的3'-OH添加核苷酸起作用。因此，所有聚合酶都以5' - 3'方向起作用。DNA復制需要DNA依賴的DNA聚合酶，實現DNA序列的完美拷貝。有些DNA聚合酶具有校對功能，能夠檢測含氮堿基之間的錯配

DNA的酶學操作

DNA的酶學操作DNA Modifying Enzymes?(Michael Blaber)Introduction to bacterial restriction/modification system. It provides very useful background knowledge

DNA連接酶簡介

DNA 連接酶是生物體內重要的酶，其所催化的反應在DNA的復制和修復過程中起著重要的作用。DNA連接酶分為兩大類:一類是利用ATP 的能量催化兩個核苷酸鏈之間形成磷酸二酯鍵的依賴ATP的DNA 連接酶，另一類是利用煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+) 的能量催化兩個核苷酸鏈之間形成磷酸二酯鍵的依賴NAD

DNA重組技術－酶切

實驗概要? ? ? ? 通過酶切獲得可進行體外重組的載體和外源DNA實驗原理? ?DNA重組技術是用內切酶分別將載體和外源DNA切開，經分離純化后，用鏈接酶將其連接，構成新的DNA分子。? ? ?限制性內切酶能特異地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附近的特異位點上，并切割雙鏈DN

DNA酶切及鑒定

實驗概要限制酶主要存在原核細胞中。多數來源于細菌，有的來源于藍藻和鏈霉菌，極少數來源于支原體等微生物中，存在原核細胞的限制酶能在特異的識別位點切斷外源DNA，如感染的噬菌體。而宿主細胞內的DNA則因它的一些特異識別位點常常由于其中一個堿基的甲基化被保護起來，從而使此位點不再成為限制酶的底物。限制性內

DNA酶切問題集錦

我們在進行分子生物學實驗，常需要對DNA片段進行酶切。在此，我們對酶切實驗中遇到的一些問題做了相應歸納。帶型原因結果分析DNA完全沒有被內切酶切割內切酶失活標準底物檢測酶活性DNA不純，含有SDS，酚，EDTA等內切酶抑制因子將DNA過柱純化，乙醇沉淀DNA條件不適（試劑、溫度）檢查反應系統是否最佳

DNA酶切實驗（圖）

采用粘末端連接必須對目的DNA分子和載體分子進行酶切以獲得相應的粘末端進行連接。酶切可以是單酶切也可以是雙酶切。單酶切操作比較簡單，但雙酶切如果兩種酶所用緩沖液成分不同（主要是鹽離子濃度不同）或反應溫度不同，這時可以采用如下措施解決： 1）先用一種酶切，然后乙醇沉淀回收DNA分子后再用另外一種酶切

DNA的酶切實驗

采用粘末端連接必須對目的DNA分子和載體分子進行酶切以獲得相應的粘末端進行連接。酶切可以是單酶切也可以是雙酶切。單酶切操作比較簡單，但雙酶切如果兩種酶所用緩沖液成分不同（主要是鹽離子濃度不同）或反應溫度不同，這時可以采用如下措施解決：1）先用一種酶切，然后乙醇沉淀回收DNA分子后再用另外一種酶切；2

DNA的酶切與連接——DNA片段連接

實驗方法原理核酸片段可以通過連接酶的作用連接起來而獲得重組分子。實驗材料λDNA EcoT14I：由11條DNA片段組成試劑、試劑盒T4 DNA連接酶及其配套的10×連接緩沖液 0.5×TBE電泳緩沖液 6×Loading Buffer Goldview 瓊脂糖儀器、耗材電泳儀 水浴鍋 移液器 微波

DNA聚合酶外切酶活性─校對作用

　　外切酶活性──校對作用：這種酶活性的主要功能是從3'→5'方向識別和切除不配對的DNA 生長鏈末端的核苷酸。當反應體系中沒有反應底物dNTP時，由于沒有 聚合作用而出現暫時的游離現象，從而被3'→5'外切酶活性所降解。如果提高反應體系的溫度可以促進這種作用，這表明

DNA拓撲異構酶（DNA－topoisomerase）的相關介紹

　　為催化DNA拓撲學異構體相互轉變的酶之總稱。催化DNA鏈斷開和結合的偶聯反應，為了分析體外反應機制，用環狀DNA為底物。在閉環狀雙鏈DNA的拓撲學轉變中，要暫時的將DNA的一個鏈或兩個鏈切斷，根據異構體化的方式而分為二個型。切斷一個鏈而改變拓撲結構的稱為Ⅰ型拓撲異構酶（top -oisomera

DNA連接酶的用途

DNA連接酶主要用于基因工程，將由限制性核酸內切酶“剪”出的粘性末端重新組合，故也稱“基因針線”。人教版高中生物選修3中提到的E·coliDNA連接酶，來源于大腸桿菌，可用于連接粘性末端；T4DNA連接酶，來源于T4噬菌體，可用于連接粘性末端和平末端，但連接效率低。

DNA連接酶的特性

良好的熱穩定性；70℃ 2h，殘留90%活性；93℃ 2h，殘留60%活性；94℃ 2h，殘留40%活性。5’→3’聚合酶活性，對dATP有優先聚合活性；5’→3’外切酶活性；無3’→5’外切酶活性。

DNA連接酶的用途

聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction, PCR)。Taq酶擴增的PCR產物，3’末端總是帶有1個非模板依賴型的突出堿基，而這個堿基幾乎總是A，因為Taq酶對dATP具有優先聚合活性，故可用T載體克隆。

DNA連接酶的缺點

無3’→5’閱讀校正功能，在PCR擴增過程可引起錯配，30次循環錯配率約0.25%。措施：選擇高保真Taq酶，如Pfu。原因：Pfu具有3’→5’外切酶活性。注意：Pfu擴增產物為平末端。

DNA－連接酶的性質

大腸桿菌的DNA連接酶是一條分子量為75Ku的多肽鏈。對胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶與NAD(而不是ATP)反應形成酶-AMP中間物，但不能繼續將AMP轉移到DNA上促進磷酸二酯鍵的形成。DNA連接酶在大腸桿菌細胞中約有300個分子，和DNA聚合酶Ⅰ的分子數

DNA－連接酶的用途

DNA連接酶主要用于基因工程，將由限制性核酸內切酶“剪”出的粘性末端重新組合，故也稱“基因針線”。人教版高中生物選修3中提到的E·coliDNA連接酶，來源于大腸桿菌，可用于連接粘性末端；T4DNA連接酶，來源于T4噬菌體，可用于連接粘性末端和平末端，但連接效率低。