菌落pcr會出現假陽性結果嗎
最近做酶切連接轉化，最后做鑒定時，以菌落為模板進行PCR時可以見到有目的條帶;當把菌落接種到LB液擴菌后，以菌液為模板進行PCR時卻什么東東都沒有?請問會是什么原因啊?多多指教啊!建議重新以菌落為模板進行PCR檢測，再重新以菌液為模板進行PCR檢測，因為菌落或者菌液PCR假陽性的幾率還是比較高的。但如果還是出現以上結果，推測很可能是平板上殘留的連接液中的未連接上載體的目的條帶引起的，此時建議再提質粒做PCR檢測和酶切檢測來徹底證明你的目的片段是否真正與載體連接成功。 個人的見解希望對你有所幫助，也期望高手們批評指正!我覺得菌落PCR效果很好，雖然有假陽性的可能，但是只要是做出來，有目的條帶一般是對的，你為什么還要用菌液做PCR?你還不如搖菌后提取質粒然后用質粒PCR或者酶切。既然你說到這個問題了，我覺得很有可能是你的質粒被稀釋了，因為在菌落中的濃度比較大。另外也有可能是你根本就沒有挑到正確的菌落來搖菌，所以就沒有質粒，怎么能做出......閱讀全文
菌落PCR
菌落PCR可用于：（1）重組體的篩選；（2）重組體DNA測序分析。實驗方法原理直接挑取菌落進行PCR，PCR的95℃加熱可以破胞，釋放基因組DNA或質粒，成為PCR體系的模板，然后進行鏈式擴增。實驗材料菌落樣品試劑、試劑盒dNTPPCR混合液儀器、耗材PCR儀實驗步驟1. ?PCR混合液的制備（1）
菌落PCR
實驗方法原理 直接挑取菌落進行PCR，PCR的95℃加熱可以破胞，釋放基因組DNA或質粒，成為PCR體系的模板，然后進行鏈式擴增。實驗材料 基因樣品試劑、試劑盒 dNTPPCR混合液儀器、耗材 PCR儀實驗步驟 1. ?PCR混合液的制備（1）Taq buffer（10×） 180 ul（2）dNT
菌落PCR
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 直接挑取菌落進行PCR，PCR的95℃加熱可以破胞，釋放基因組DNA或質粒，成為PCR體系的模板，然后進行鏈式擴增。 實驗材料 菌落樣品
菌落PCR（Colony－PCR）方法
菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因組DNA，不必酶切鑒定，而是直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進行PCR擴增，省時少力。建議使用載體上的通用引物。通常利用此方法進行重組體的篩選或者DNA測序分析。最后的PCR產物大小是載體通用引物之間的插入片斷大小。具體方法：1、PCR混合物的制備T
菌落pcr步驟
一、引言常規的PCR擴增需要進行細菌培養、質粒制備等多步操作后才能進行基因擴增,操作繁瑣耗時較長,同時在反復的操作中DNA量損失也較大,產率較低。在1989年 Gussow Clackson3建立了菌落PCR( colony PCR)法,菌落PR與我們通常的普通DNA的PCR的不同在于,直接以單個菌
菌落PCR實驗
菌落PCR標簽： 菌落 PCR菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因組DNA，不必酶切鑒定，而是直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進行PCR擴增，省時少力。建議使用載體上的通用引物。通常利用此方法進行重組體的篩選或者DNA測序分析。最后的PCR產物大小是載體通用引物之間的插入片斷大小。
菌落PCR（Colony－PCR）具體方法
菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因組DNA，不必酶切鑒定，而是直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進行PCR擴增，省時少力。建議使用載體上的通用引物。通常利用此方法進行重組體的篩選或者DNA測序分析。最后的PCR產物大小是載體通用引物之間的插入片斷大小。具體方法：1、PCR混合物的制
酵母菌落PCR方法
問：很郁悶，zui近在做電轉畢赤酵母，但是轉化完了沒有合適的篩選方法，如果提基因組的話費時費錢，而且由于我這個電轉的幾率十分低，也就有1%-10%，所以想用菌落PCR方法篩選，但酵母菌破壁很困難，如果處理不好的話基因組釋放不出來，就沒有陽性結果了。查了一些資料說用反復凍融法，是不是直接挑單菌落就行了
利用PCR分析酵母菌落
利用PCR分析酵母菌落主要用于確定酵母中是否攜帶目的DNA序列。實驗方法原理用 PCR 分析酵母菌落時，無需純化 DNA。本方案以單個酵母菌落的粗裂解液作為 PCR 擴增的模板，來確定酵母中是否攜帶目的 DNA 序列。?實驗材料Taq DNA 聚合酶寡核苷酸引物DNA 標準參照物YAC 重組子的酵母
什么是菌落pcr假陽性
利用菌落作為模板進行PCR擴增，驗證該菌落里是否帶有目標片段。但是由于PCR是一個級聯放大的過程，所以即使菌落中不含有目標片段，而是菌落表面沾有一部分之前連接，轉化中用的目標DNA，也會導致PCR獲得擴增條帶，從而誤認為這個菌落已經帶有了目標片段，稱之為假陽性。可以通過提質粒酶切，或者測序驗證，排除
利用PCR分析酵母菌落
利用PCR分析酵母菌落 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 用 PCR 分析酵母菌落時，無需純化 DNA。本方案以單個酵母菌落的粗裂解液作為 PCR 擴增的模板，來確定酵母中是否攜
利用PCR分析酵母菌落
實驗方法原理 用 PCR 分析酵母菌落時，無需純化 DNA。本方案以單個酵母菌落的粗裂解液作為 PCR 擴增的模板，來確定 YAC 中是否攜帶目的 DNA 序列。實驗材料 Taq DNA 聚合酶寡核苷酸引物DNA 標準參照物YAC 重組子的酵母菌株試劑、試劑盒 PCR 緩沖液dNTP 溶液儀器、耗材
菌落PCR，快速鑒定重組質粒
質粒快速鑒定????試劑：?Protoplasting buffer:?30mM Tris-HCl, pH8.0????????????????????0.33ml/1.0M????????5mM?EDTA????????????????????????????????0.1ml/0.5M?????
菌落－PCR－分析克隆的重組體實驗
菌落 PCR 分析克隆的重組體實驗試劑、試劑盒溴化乙錠Taq 延伸 PCR 添加劑Tween2010% 溶液dNTP 溶液PCR 緩沖液熱穩定 DNA 聚合酶引物儀器、耗材無菌槍頭瓊脂糖凝膠電泳設備和試劑實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑溴化乙錠Taq 延伸 PCR 添加劑（Stratagen
技術和方案15－酵母菌落PCR
實驗步驟
菌落－PCR－分析克隆的重組體實驗
試劑、試劑盒 溴化乙錠Taq 延伸 PCR 添加劑Tween2010% 溶液dNTP 溶液PCR 緩沖液 熱穩定 DNA 聚合酶引物儀器、耗材 無菌槍頭瓊脂糖凝膠電泳設備和試劑實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑溴化乙錠Taq 延伸 PCR 添加劑（Stratagene)Tween20，10%
菌落－PCR－分析克隆的重組體實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因組DNA，不必酶切鑒定，而是直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進行PCR擴增，省時少力。使用載體上的通用引物，進行重組體的篩選或者DNA測序分析。最后的PCR產物大小是載體通用
菌落pcr會出現假陽性結果嗎
最近做酶切連接轉化，最后做鑒定時，以菌落為模板進行PCR時可以見到有目的條帶;當把菌落接種到LB液擴菌后，以菌液為模板進行PCR時卻什么東東都沒有?請問會是什么原因啊?多多指教啊!建議重新以菌落為模板進行PCR檢測，再重新以菌液為模板進行PCR檢測，因為菌落或者菌液PCR假陽性的幾率還是比較高的。但
菌落PCR的操作步驟及儀器有哪些
1.取15-20ul Tris-HCl 放到編好號的0.5ml 的ep管中2.用滅菌牙簽，或槍頭，沾取少量菌體（多了效果不好）3.并將槍頭或牙簽在剛取出來的Tris-HCl中涮一下，可以看到溶液略微變渾濁4.蓋上管蓋，100C煮沸5-10min5.離心，取1-2ul上清配制PCR反應體系。如果菌體較
cDNA文庫組標準流程七:快速鑒定、菌落PCR
1．質粒快速鑒定??試劑：Protoplasting buffer:30mM Tris-HCl, pH8.0 ??????????????????0.33ml/1.0M????? 5mM EDTA ??????????????????????????????0.1ml/0.5M????? 50mM
酵母遺傳學方法12：酵母菌落PCR方法
酵母菌落PCR方法1．在冰上配制反應混合液：2μl??????????????????10×菌落PCR緩沖液1.2μl?????????????????25mmol/L MgCl20.4μl?????????????????10mmol/L dNTPs10pmol????????????????引物
平板菌落計數法菌落總數介紹
菌落是指細菌在固體培養基上生長繁殖而形成的能被肉眼識別的生長物，它是由數以萬計相同的細菌集合而成。當樣品被稀釋到一定程度，與培養基混合，在一定培養條件下，每個能夠生長繁殖的細菌細胞都可以在平板上形成一個可見的菌落。 菌落總數就是指在一定條件下（如需氧情況、營養條件、pH、培養溫度和時間等）每克
菌落總數標準，菌落總數計數方法
膨化食品的菌落總數不得超過10000cfu/g，大腸菌群不得超過90MPN/100g。固體飲料產品的菌落總數不得超過1000cfu/g，大腸菌群應不得超過90MPN/100g，霉菌不得超過50cfu/g。食醋中的菌落總數不得超過10000cfu/mL。一、菌落總數標準1、膨化食品：膨化食品的菌落總數
菌落總數標準，菌落總數計數方法
膨化食品的菌落總數不得超過10000cfu/g，大腸菌群不得超過90MPN/100g。固體飲料產品的菌落總數不得超過1000cfu/g，大腸菌群應不得超過90MPN/100g，霉菌不得超過50cfu/g。食醋中的菌落總數不得超過10000cfu/mL。一、菌落總數標準1、膨化食品：膨化食品的菌落總數
菌落總數
一、菌落總數介紹： 菌落是指細菌在固體培養基上生長繁殖而形成的能被肉眼識別的生長物，它是由數以萬計相同的細菌集合而成。當樣品被稀釋到一定程度，與培養基混合，在一定培養條件下，每個能夠生長繁殖的細菌細胞都可以在平板上形成一個可見的菌落。 菌落總數就是指在一定條件下（如需氧情況、營養條件、pH、培養
菌落總數
一、菌落總數介紹： 菌落是指細菌在固體培養基上生長繁殖而形成的能被肉眼識別的生長物，它是由數以萬計相同的細菌集合而成。當樣品被稀釋到一定程度，與培養基混合，在一定培養條件下，每個能夠生長繁殖的細菌細胞都可以在平板上形成一個可見的菌落。 菌落總數就是指在一定條件下（如需氧情況、營養條件、pH、培養
菌落總數測定菌落計數的注意事項
(1)如果稀釋度大的平板上菌落數反比稀釋度小的平板上菌落數高，則系檢驗工作中發生的差錯，屬實驗室事故。此外，也可能因抑菌劑混入樣品中所致，均不可用作檢樣計數報告的依據。 (2)如果平板上出現鏈狀菌落，菌落之間沒有明顯的界限，這是在瓊脂與檢樣混合時，一個細菌塊被分散所造成。一條鏈作為一個菌落計，
菌落總數介紹
菌落是指細菌在固體培養基上生長繁殖而形成的能被肉眼識別的生長物，它是由數以萬計相同的細菌集合而成。當樣品被稀釋到一定程度，與培養基混合，在一定培養條件下，每個能夠生長繁殖的細菌細胞都可以在平板上形成一個可見的菌落。 菌落總數就是指在一定條件下（如需氧情況、營養條件、pH、培養溫度和時間等）每克
菌落計數方法
平板菌落計數法，是種統計物品含菌數的有效方法。方法如下：將待測樣品經適當稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個細胞，取一定量的稀釋樣液涂布到平板上，經過培養，由每個單細胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個單菌落應代表原樣品中的一個單細胞；統計菌落數，根據其稀釋倍數和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數
菌落是什么
菌落是指單個細菌生長繁殖產生的,由無數細菌組成的細菌集團.一般來講,細菌的細胞形態影響菌落特征,比如S型肺炎雙球菌帶莢膜,其菌落表面光滑,R型肺炎雙球菌無莢膜,菌落表面粗糙.同樣,霉菌菌絲較放線菌粗大,因此菌落分布比較疏散,能蔓延至整個培養基.其原因：菌落的特征是細菌自身的形態結構以及營養特性在菌落