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提質粒是分子生物學中基本，easy的實驗。完全不需要借助大腦，直接照著提取試劑盒中的操作說明傻瓜操作即可（其實應該由機器人在實驗室中操作這些簡單卻耗時的實驗）。盡管操作簡單，提質粒卻也是一個比較重要的步驟，提出質粒的質量和數量將直接決定著后續實驗室的成敗。當我們按照試劑盒中操作說明進行操作時，我們會看到P1，P2，N3, PE，EB等不同的溶液（不同試劑盒可能標識不同）。那么大家是否知道每瓶溶液中裝的什么？它們在質粒提取過程中的作用又是怎樣的？ 質粒提取采用的是強堿裂解法（alkaline lysis），那么我們現在來看一下溶液 P1 ， P2， N3, PE, EB都是什么。 溶液1（P1） 組分濃度 25 mM Tris-HCl（pH8.0），10 mM EDTA，50 mM 葡糖糖（Glucose） 溶液1的主要作用是將菌體沉淀懸浮起來。25mM Tris-HCl是緩沖溶液，保證反應體系的pH恒定......閱讀全文
一、RNA 制備 模板mRNA 的質量直接影響到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的結構特點,容易受RNA 酶的攻擊反應而降解,加上RNA 酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA 酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA 酶,人
第一節 概 述 從真核生物的組織或細胞中提取mRNA,通過酶促反應逆轉錄合成cDNA的第一鏈和第二鏈,將雙鏈cDNA和載體連接,然后轉化擴增, 即可獲得cDNA文庫,構建的cDNA文庫可用于真核生物基因的結構、表達和調控的分析;比較cDNA和相應基因組DNA序列差異可確定內含子存在和了解轉錄后加工
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。一、原理與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。 本文主要通過以下幾個方面來詳細地介紹一下Western Blot技術: 一、原理 二、分類
實驗方法原理 與制備用化學方法進行轉化的感受態細胞相比，制備電轉化的感受態細胞要容易得多。細菌簡單地生長至對數中期、冷卻、離心，用冰冷的水或緩沖液充分洗凈以降低細胞懸液的離子強度，而后再用含 10% 甘油的冰冷緩沖液懸浮。實驗材料 質粒 DNA試劑、試劑盒 甘油純水SOC 培養液儀器、耗材 CYTL
實驗方法原理 轉化（transformation）是某一基因型的細胞從周圍介質中吸收來自另一基因型的細胞的DNA而使它的基因型和表型發生相應變化的現象。該現象首先發現于細菌。也是細菌
材料許多生物是疾病研究或探索使細胞和機體應對和存活于不同刺激下的分子適應機制的優良模型。 cDNA 文庫的構建和隨后目的基因的篩選可促使研究者發現在調節和響應某些外部特定環境壓力中有重要作用，而在其他體系中可能不表達或者不存在的新基因。確定這些新基因的可讀框，進一步分析其編碼蛋白質的功能可以開創全新
實驗步驟 一、材料 所有化學試劑均為分子生物學級純度。所用塑料和玻璃制品，包括瓶子和移液器吸頭均經高壓蒸氣滅菌。涉及核酸的操作均需帶手套。 1.總 RNA提取 （1）無 RNase 水。加 I mL 焦 炭 酸 二 乙
大腸桿菌的電擊轉化實驗可以用于：更為簡便快捷地進行轉化。實驗方法原理轉化（transformation）是某一基因型的細胞從周圍介質中吸收來自另一基因型的細胞的DNA而使它的基因型和表型發生相應變化的現象。該現象首先發現于細菌。也是細菌間遺傳物質轉移的多種形式中最早發現的一種，它不同于通過噬菌體感染
第一節 概述 聚合酶鏈反應或多聚酶鏈反應（Polymerase Chain Reaction, PCR），又稱無細胞克隆技術(“free bacteria”cloning technique)，是一種對特定的DNA片段在體外進行快速擴增的新方法。該方法一改傳統分子克隆技術的模式，不通過活細胞，操作