反向PCR
實驗方法原理 標準 PCR 技術應用于定位在兩個引物之間（指向內部）的一段 DNA 片段的擴增。與此相反，反向 PCR (inverse PCR) 應用于擴增和克隆與已知 DNA 序列某一個末端相鄰的側翼的未知 DNA 序列，這種未知序列沒有引物可以利用。該項技術由幾個研究小組開發（Ochmanetal. 1988; Triglia et al. 1988; Silver and Keerikatte 1989)，包括對含有已知序列以及側翼區域的基因組 DNA 樣品用一種在靶序列中無切點的限制性內切酶消化；酶切片段（如果是總的哺乳動物基因組 DNA，這種酶切片段往往有成千上萬種）依靠分子內部連接發生自身環化；然后用這種自身環化的 DNA 作為 PCR 擴增的模板。實驗用一對與已知序列的兩端特異性結合的引物，通過二個方向向夾在中間的未知序列區域擴增。實驗材料 噬菌體 T4 連接酶限制性內......閱讀全文
反向PCR
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 標準 PCR 技術應用于定位在兩個引物之間（指向內部）的一段 DNA 片段的擴增。與此相反，反向 PCR (inverse PCR) 應用于擴增和克隆與已知 DNA 序列某一個末端相鄰的側翼的未知 DNA 序列，這種未知
反向PCR
實驗方法原理?標準 PCR 技術應用于定位在兩個引物之間（指向內部）的一段 DNA 片段的擴增。與此相反，反向 PCR (inverse PCR) 應用于擴增和克隆與已知 DNA 序列某一個末端相鄰的側翼的未知 DNA 序列，這種未知序列沒有引物可以利用。該項技術由幾個研究小組開發（Ochm
反向PCR
主要內容如下：·?????????RT-PCR·?????????Competitive and Quantative RT-PCR·?????????In Situ RT-PCR·?????????RL-PCR·?????????DNA Contamination·?????????RT-PCR
反向PCR
標準 PCR 技術應用于定位在兩個引物之間（指向內部）的一段 DNA 片段的擴增。與此相反，反向 PCR (inverse PCR) 應用于擴增和克隆與已知 DNA 序列某一個末端相鄰的側翼的未知 DNA 序列，這種未知序列沒有引物可以利用。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原
什么是反向 PCR？反向 PCR的特點
常規 PCR 是擴增兩引物之間的 DNA 片段,反向 PCR(reverse PCR)是用引物來擴增兩引物以外的 DNA 片段。一般先用限制性內切酶酶解 DNA(目的基因中不存在該酶的酶切位點,且片段應短于2～3kb),然后用連接酶使帶有黏性末端的靶片段自身環化,最后用一對反向引物進行 PCR,得到
反向PCR（inverse PCR）簡介
反向PCR是一種多聚合酶鏈式反應（PCR）應用的方法，可使已知序列的核心區邊側的未知DNA成幾何級數擴增。用適當的限制性內切裂解含核心區的DNA，以產生適合于PCR擴增大小的片段，然后片段的末端再連接形成環狀分子。PCR的引物同源于環上核心區的末端序列，但其方向可使鏈的延長經過環上的未知區而不是分開
反向PCR （inverse-PCR）
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 反向PCR可用于研究與已知DNA區段相連接的未知染色體序列，因此又可稱為染色體緩移或染色體步移。這時選擇的引物雖然與核心DNA區兩末端序列互補，但兩引物3’端是相互反向的。擴增前先用限制性內切酶酶切樣品DNA，然后用DNA連接
反向PCR （inverse-PCR）
實驗方法原理 反向PCR是克隆T-DNA插入位點側翼DNA序列非常有效的方法。?1. ?選擇合適的限制性內切酶位點。并在T-DNA的邊界（左邊界、右邊界均可）和酶切位點附近設計引物P1、P2；2. ?回收DNA，T4連接酶連接，使酶切后的DNA片段環化；3. ?回收連接后的DNA，用引物P1、P2做
反向PCR （inverse-PCR）
利用反向PCR可對未知序列擴增后進行分析，探索鄰接已知DNA片段的序列，并可將僅知部分序列的全長cDNA進行分子克隆，建立全長的DNA探針。可用于：（1）基因游走研究；（2）轉位因子研究；（3）已知序列DNA旁側病毒整合位點分析等研究。實驗方法原理反向PCR可用于研究與已知DNA區段相連接的未知染色
PCR技術（十四）：反向PCR
描述一種大聚合酶鏈反應(PCR)應用的方法，使在已知序列的核心區邊側的未知 DNA成幾何級數擴增。用適當的限制性內切裂解含核心區的DNA，以產生適合于PCR擴 增大小的片段，然后片段的末端再連接形成環狀分子。PCR的引物同源于環上核心區 的末端序列，但其方向性，使鏈的延長經過環上的未知區而不是分開引