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聚合酶鏈式反應簡稱PCR（英文全稱：Polymerase Chain Reaction）（又稱：多聚酶鏈式反應），聚合酶鏈式反應，是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法，由高溫變性、低溫退火（復性）及適溫延伸等幾步反應組成一個周期，循環進行，使目的DNA得以迅速擴增，具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、省時等特點。實驗材料探針試劑、試劑盒SSCSDS顯影液定影液蘇木精PBSAEC封阻液NaClTris·Cl二甲基甲酰胺BCIPNBT乙醇儀器、耗材培養箱蓋玻片載玻片干燥劑加濕盒實驗步驟1. 配如下雜交混合液 （1）2 μl 200 pmol/l 探針（終濃度4 pmol/l） （2）50 μl 去離子的甲酰胺（終濃度50%） （3）10 μl 20×SSC（終濃度2×） （4）10 μl 100×Denhardt 溶液（終濃度10×） （5）10 μl 10 mg/ml ......閱讀全文
聚合酶鏈式反應簡稱PCR（英文全稱：Polymerase Chain Reaction）（又稱：多聚酶鏈式反應），聚合酶鏈式反應，是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法，由高溫變性、低溫退火（復性）及適溫延伸等幾步反應組成一個周期，循環進行，使目的DNA得以迅速擴增，具有特異性強、靈敏度高、操作簡便
實驗材料 探針 試劑、試劑盒 SSC SDS
實驗材料 探針試劑、試劑盒 SSCSDS顯影液定影液蘇木精PBSAEC封阻液NaClTris·Cl二甲基甲酰胺BCIPNBT乙醇儀器、耗材 培養箱蓋玻片載玻片干燥劑加濕盒實驗步驟 1. 配如下雜交混合液 （1）2 μl 200 pmol/
PCR擴增反應完成之后，必須通過嚴格的鑒定，才能確定是否真正得到了準確可靠的預期特定擴增產物。凝膠電泳是檢測PCR產物常用和zui簡便的方法，能判斷產物的大小，有助于產物的鑒定。凝膠電泳常用的有瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳，前者主要用于DNA pian段大于100bp者，后者主要用
PCR擴增反應完成之后，必須通過嚴格的鑒定，才能確定是否真正得到了準確可靠的預期特定擴增產物。凝膠電泳是檢測PCR產物常用和最簡便的方法，能判斷產物的大小，有助于產物的鑒定。凝膠電泳常用的有瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳，前者主要用于DNA片段大于100bp者，后者主要用來檢測小片段DNA。1．
引物設計主要是要注意以下幾個事項： （1）發夾結構； （2）反向配對； （3）GC含量（40－60%）； （4）退火溫度（45－65度）； （5）引物長度（18－27bp）； （6）3' 端最好是C、G（提高結合度）； （7）引物在序列中的錯配位點。 大致就這幾個方面，重要性
實驗目的 為了獲得大量的AKP基因，我們需要將目的基因通過PCR擴增基因劑量，方便下一步實驗作基因重組。 我們需要注意PCR產物的準確性和產率。特別注意引物、復性溫度、TaqE對準確性的影響和延伸時間（1000bp/min）、Mg2+濃度、循環數（小于等于30）對產率的影響。
孔板夾心雜交法： 該法是通過一固定于微孔板的捕獲探針與PCR產物的某一區域特 異雜交使產物的間接地固定于微孔板上，然后，再用一生物素 等非放射性標記物標記的檢測探針與產物的另一特異性較一次 雜交，漂洗后顯色即可判斷結果。該法需要兩個雜交過程來檢測 一個產物，因此，其特異性較一次雜交的檢測法高。該法
實驗概要PCR擴增產物可以通過酶切分析、凝膠電泳（瓊脂糖電泳、聚丙烯酰胺電泳、毛細管電泳等）、Southern雜交、克隆、測序等方法分析，電泳前還可以應用紫外分光光度計定量DNA。當采用凝膠電泳時也有溴化乙錠顯色、銀染法、熒光顯色等不同的顯色方法。本實驗室采用的是非變性連續緩沖系統聚丙烯酰胺凝膠垂直
平端連接法 TA克隆法 實驗方法原理 平頭連接是將制備好的平頭載體和補平或削平的PCR產