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    分子雜交技術的發展歷程

    通過堿基對之間非共價鍵的形成即出現穩定的雙鏈區,這是核酸分子雜交的基礎。使單鏈聚合雙鏈的過程稱為退火或復性。核酸雜交技術基本上是Hall等1961年的工作開始的,探針與靶序列在溶液中雜交,通過平衡密度梯度離心分離雜交體。該法很慢、費力且不精確,但它開拓了核酸雜交技術的研究。Bolton等1962年設計了第一種簡單的固相雜交方法,稱為DNA-瓊脂技術。變性DNA固定在瓊脂中,DNA不能復性,但能與其它互補核酸序列雜交。典型的反應是用放射性標記的短DAN或RNA分子與膠中DNA雜交過夜,然后將膠置于柱中進行漂洗,去除游離探針,在高溫、低鹽條件下將結合的探針洗脫,洗脫液的放射性與結合的探針量呈正比。該法尤其適用于過量探針的飽和雜交實驗。60年代末,Britten等設計了另一種分析細胞基因組的方法。該法是研究液相中DNA的復性以比較不同來源核酸的復雜度,典型的方法是:從不同生物體(細菌、酵母、魚和哺乳動物等)內分離DNA,用水壓器剪切成......閱讀全文

    分子雜交技術的發展歷程

    通過堿基對之間非共價鍵的形成即出現穩定的雙鏈區,這是核酸分子雜交的基礎。使單鏈聚合雙鏈的過程稱為退火或復性。核酸雜交技術基本上是Hall等1961年的工作開始的,探針與靶序列在溶液中雜交,通過平衡密度梯度離心分離雜交體。該法很慢、費力且不精確,但它開拓了核酸雜交技術的研究。Bolton等1962年設

    熒光原位雜交技術的發展歷程

      1969年,Pardue和John等兩個研究小組開始采用放射性標記DNA或28S RNA發明了原位雜交技術(ISH)。盡管當時原位雜交技術已經具有較高的特異性和靈敏度,但鑒于放射性同位素自身特性的局限,如安全性、空間分辨率低、不穩定性等問題,這項技術僅限于實驗室研究方面的應用。  1986年科研

    熒光原位雜交的發展歷程

      位點數目及檢測目標  在FISH 技術基本確立之后,FISH 不僅用于單基因或核酸檢測,FISH 技術的進一步發展擴展到多色FISH 多基因位點同時檢測,從基因檢測發展到基因組、染色體、活細胞中轉錄產物mRNAs 原位檢測以及組織水平的核酸檢測,并且在今后的研究中還有可能應用到整個生物體的檢測。

    DNA技術的發展歷程

      我國法醫DNA技術的發展道路不是很長,但卻取得了突出的成果,在偵查破案中發揮了巨大的作用。  在“七五”后期,從1987年起,我國正式立項對DNA指紋技術進行研究,經過兩年的努力,至1989年我國首次把DNA指紋技術應用于辦案,開始了我國 法醫DNA檢驗的新時代。隨著DNA指紋技術的不斷應用,技

    分子雜交技術

    分子雜交技術?  互補的核苷酸序列通過Walson-Crick堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。  雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DNA或總R

    分子雜交技術-Northern雜交的簡介

      Northern雜交與Southern雜交很相似。主要區別是被檢測對象為RNA,其電泳在變性條件下進行,以去除RNA中的二級結構,保證RNA完全按分子大小分離。變性電泳主要有3種:乙二醛變性電泳、甲醛變性電泳和羥甲基汞變性電泳。電泳后的瓊脂糖凝膠用與Southern轉移相同的方法將RNA轉移到硝

    分子影像學在中國的發展歷程

    在過去的近百年里, 醫學影像學發展的主要動力來自物理學和計算機科學, 而 21 世紀以來,影像醫學影像發展的主要的因素將是基因組學和生物化學。隨著人類基因組測序工作的完成以及基因和蛋白質組學等研究的不斷深入, 以細胞病理學為基礎的現代醫學正逐步向分子醫學方向發展。而作為連接分子生物學與臨床醫

    分子雜交技術的幾種常見的雜交

    分子雜交是通過各種方法將核酸分子固定在固相支持物上,然后用放射性標記的探針與被固定的分子雜交,經顯影后顯示出目的DNA或RNA分子所處的位置。根據被測定的對象,分子雜交基本可分為以下幾大類:(1) Southern雜交:DNA片段經電泳分離后,從凝膠中轉移到硝酸纖維素濾膜或尼龍膜上,然后與探針雜交。

    分子雜交技術的技術簡介

      雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DNA或總RNA。根據使用的方法被檢測的核酸可以是提純的,也可以在細胞內雜交, 即細胞原位雜交。探針必須經過標記,以便示蹤和檢測。使用最普遍的探針標記物是同位素, 但由于同位素的安全性,近年來發展了許多非同

    分子雜交技術-Northern雜交的操作步驟

      (1)RNA經變性電泳完畢后,可立即將乙醛酰RNA轉移至硝酸纖維素濾膜上。轉移方法與轉移DNA的方法相似。  (2)轉移完畢后 ,以6×SSC溶液于室溫浸泡此膜5分鐘,以除去瓊脂糖碎片。  (3)將該雜交膜夾于兩張濾紙中間,用真空烤箱于80℃干燥0.5-2小時。  (4) 用下列兩種溶液之一進行

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