新技術丨孟安明組建立未成熟卵母細胞原位操作新技術
基因突變與轉基因技術已經成為基因功能研究、細胞譜系追蹤和人類疾病建模等的重要工具。目前進行這些遺傳操作通常是通過顯微注射將相應的物質導入受精卵中，但是通過這種方式建立的突變體或轉基因動物往往是嵌合體，若想得到穩定的雜合體或純合體分別需要至少再傳一代或兩代，因此科學家一直在尋找方法對配子進行遺傳操作，以降低時間和人力成本。 雌配子由于體積大，成為配子操作的首選。卵母細胞作為雌性配子，在卵巢中發育成熟。并且，卵母細胞的成熟過程十分復雜，需要多種垂體促性腺激素和性類固醇參與調節。包裹在卵母細胞周圍的體細胞（如卵泡細胞和顆粒細胞等）對其成熟也是必不可少的。因此，未成熟卵母細胞的體外培養仍然是一項具有挑戰性的工作。如果能夠在體內對未成熟卵母細胞進行遺傳操作，并使其仍在體內繼續發育成熟，這將對配子遺傳操作提供極大的便利。 針對上述問題，近日，清華大學生命學院孟安明院士團隊在Journal of Molecular Cell Biol......閱讀全文
新技術丨孟安明組建立未成熟卵母細胞原位操作新技術
基因突變與轉基因技術已經成為基因功能研究、細胞譜系追蹤和人類疾病建模等的重要工具。目前進行這些遺傳操作通常是通過顯微注射將相應的物質導入受精卵中，但是通過這種方式建立的突變體或轉基因動物往往是嵌合體，若想得到穩定的雜合體或純合體分別需要至少再傳一代或兩代，因此科學家一直在尋找方法對配子進行遺傳操
原位PCR和原位RT-PCR操作規程
原位PCR是Hasse等于1990年建立的技術,就是在組織細胞里進行PCR反應,它結合了具有細胞定位能力的原位雜交和高度特異敏感的PCR技術的優點,是細胞學科研與臨床診斷領域里的一項有較大潛力的新技術。一、儀器設備英國Thermo Hybaid原位PCR儀。二、操作流程1、原位PCR步驟（1）預處理
原位PCR和原位RT-PCR操作規程
（一）、儀器設備 英國Thermo Hybaid原位PCR儀。 （二）、操作流程 1、原位PCR步驟 1）預處理： （1）切片常規脫蠟； （2）0.2mol/L HCl處理10min； （3）5μg/ml蛋白酶K消化組織37℃10m
原位雜交操作規程
?（一）、儀器設備????? 醫用微波爐；?水浴鍋。?????（二）、試劑????? 0.2mol/L HCl：HCl 8.2ml，H20?定容0.5L。0.1mol/L三乙醇胺(pH8.0):三乙醇胺?5.33ml，H20?定容0.4L。.5ml/L醋酸-2.5ml/L醋酸酐:三乙醇胺?13.2m
原位雜交操作方法
（一）、儀器設備?醫用微波爐； 水浴鍋。（二）、試劑?0.2mol/L HCl：HCl 8.2ml，H20 定容0.5L。0.1mol/L三乙醇胺(pH8.0):三乙醇胺 5.33ml，H20 定容0.4L。.5ml/L醋酸-2.5ml/L醋酸酐:三乙醇胺 13.2ml，NaCl 5g，濃HCl 4
原位雜交實驗操作步驟
一質粒制備1質粒的轉化和擴增1.1制備XL1-Blue感受態細菌1.取400uLXL1-Blue菌種加入到含200mllb培養基的錐形瓶中，37℃、100rpm培養4h，離心，倒置，以冰冷的0.1mol/LCaCl_2重懸細菌，冰浴30min，離心，棄上清，倒置，再加4ml(含15%甘油)冰冷的Ca
原位壓力機操作規程
原位壓力機操作規程：★通過加油孔加入20#液壓油或20#機油1.5升；★將原位壓力機各零部件組裝成一個自身平衡的測力位置；★逆時針旋轉泄油閥，再次擰緊四根拉力桿；★順時針旋緊泄油閥，使壓力桿加壓力，加置80-100kN時，逆時針旋轉泄油閥，將扁式千斤頂復原位然后順時針旋轉將泄油閥擰緊。然后檢查四根樣
次級卵母細胞和初級卵母細胞的區別
次級卵母細胞是初級卵母細胞經過減數第一次分裂得到的，所以次級卵母細胞內的染色體數為初級卵母細胞的一半，染色體組的數目也只有初級卵母細胞的一半，核DNA數也只有初級卵母細胞的一半。初級卵母細胞內的染色體都有單體，次級卵母細胞的前期和中期有單體,后期末期沒有!人的初級卵母細胞出生時即已存在，為四倍體細胞
次級卵母細胞和初級卵母細胞的區別
次級卵母細胞是初級卵母細胞經過減數第一次分裂得到的，所以次級卵母細胞內的染色體數為初級卵母細胞的一半，染色體組的數目也只有初級卵母細胞的一半，核DNA數也只有初級卵母細胞的一半。初級卵母細胞內的染色體都有單體，次級卵母細胞的前期和中期有單體,后期末期沒有!人的初級卵母細胞出生時即已存在，為四倍體細胞
直接原位PCR（In situ PCR）操作方法
原位PCR是原位雜交細胞定位和PCR的高靈敏度相結合的技術，使得靶基因檢測有了極大的改進。此技術是在細胞（爬片、甩片或涂片）或組織（石蠟、冰凍切片）上直接對靶基因片段進行擴增，通過摻入標記基團直接顯色或結合原位雜交進行檢測的方法。1．組織切片和細胞樣品的制備【試劑與配置】10%福爾馬林二甲苯PBS【