準備好恒流泵、分部收集器、核酸蛋白檢測儀及記錄儀打開柱上端的螺絲帽塞子,吸出層析柱中多余液體直至與膠面相切沿管壁將5%丙酮溶液0.6 mL小心加到凝膠床面上,應避免將床面凝膠沖起 (參考完成時間11:30)打開下口夾子,使樣品溶液流入柱內,同時收集流出液,當樣品溶液流至與膠面相切時,夾緊下口夾子按加樣操作,用1 mL洗脫液沖洗管壁2次加入3-4 mL洗脫液于凝膠上,旋緊上口螺絲帽將層析柱進水口連通恒流泵,柱出水口與核酸蛋白質檢測儀比色池進液口相連,比色池出液口再與自動部分收集器相連,用兩根導線將檢測儀與記錄儀連接起來,設置好基線的位置洗脫時,打開上、下進出口夾子,用0.02mol/LpH8.0的PBS,以0.5~1 mL/min流速洗脫,記錄tr(記錄儀紙速設為12cm/h,電壓200mv;核酸蛋白監測儀檢測波長254nm,靈敏度為0.1A), 計算單位高度的柱效 (參考完成時間16:00)柱效計算公式:N = 5.54......閱讀全文
分子篩定義分子篩層析,又稱為凝膠過濾層析或體積排阻層析。分子篩層析是利用有一定孔徑范圍的多孔凝膠作為固定相,對混合物中各組分按分子大小進行分離的層析技術。具有分子篩作用的物質很多,如浮石、瓊脂、瓊脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝膠等。避開原因一:工藝放大困難分子篩層析無法遵循線性放大原則,即使遵
一、實驗目的和內容目的:1. 掌握凝膠過濾層析的原理,掌握凝膠柱柱效測定方法;2. 熟悉凝膠層析的一般過程;3. 了解凝膠介質的選擇原則和應用領域。內容:1. Sephadex G-50凝膠柱的裝填;2. 凝膠柱柱效測定;3.凝膠再生的方法。二、實驗儀器和試劑1. 實驗儀器層析柱(1×40 cm),
淺述蛋白質分離純化的新技術摘 要: 本文主要介紹了濁點萃取法、置換色譜法、親和層析法、親和色譜法、凝膠電泳、雙水相萃取等蛋白質的最新分離純化技術,綜和近年來國內外的一些研究結果,結合實際應用的例子,分析了各種分離純化方法的優點,同時指出其不足之處。文章最后展望了蛋白質分離純化技術的發展趨勢。&nbs
全面的、針對生物醫藥分離純化的解決方案 如本文前面所述,處于生物醫藥的研發、生產、質控、監管等各環節的客戶有不同的要求。東曹專注于該領域40余年,提供了非常全面的分離純化解決方案。 東曹擁有種類齊全的TSK-GEL系列色譜柱,包括:尺寸排阻(SEC)、離子
在這篇文章中,我們將介紹一些實驗室裝柱的注意要點,以饗讀者: 一、實驗室空柱的選擇 空柱的材質有塑料,玻璃及金屬,材質不同,空柱能夠承受的最大壓力和應用范圍也不同。GE 提供的空柱為玻璃材質,適合多種生物大分子的分離純化,主要有三類:XK 柱,Tricon 柱及 HiScale 柱。 空柱分類
空柱的準備準備步驟:空柱中篩網需要定期用 0.5 M 的 NaOH 超聲清洗,并且用 20 % 乙醇排除氣泡,內部接一定要確保擰緊,各個部件組裝完成后用水檢查氣密性。將空柱用柱夾固定,連接到層析儀中,保證水平和垂直,對于凝膠過濾填料的裝填,需要用水平儀檢查。 填料勻漿的準備反復使用的填料:
(1)、裝柱前要仔細看填料的使用說明書,每種填料都有自己的特性,以及特殊的裝柱方法,針對不同的空柱,也要注意方法可能不同;3、這一點非常重要:裝柱包括以后使用中絕對不允許柱內進入氣泡(bubble free),柱頭事先也要排除氣泡。(2)、填料要加水攪拌成均勻懸液,懸液濃度依填料而不同,一般70-8
裝柱前要仔細看填料的使用說明書,每種填料都有自己的特性,以及特殊的裝柱方法,針對不同的空柱,也要注意方法可能不同。 1、裝柱前要仔細看填料的使用說明書,每種填料都有自己的特性,以及特殊的裝柱方法,針對不同的空柱,也要注意方法可能不同; 2、填料要加水攪拌成均勻懸液,懸液濃度依填料而不同,一般70-8
12 問:分析HPLC如何放大到制備型HPLC?在分析液相中色譜柱的典型進樣量是微克級,甚至更低。樣品量和固定相之比有的甚至小于1:10000。進樣體積一般來說都大大小于色譜柱體積(小于1:100)。 在這種條件下,會達到很好的分離效果,峰形尖銳并且很對稱。分析系統線形放大到制備型HPLC意味著使用
制備色譜技術與操作 1 制備色譜到底是什么?請介紹一下制備色譜?答; 有些搞分析色譜的朋友,對制備色譜這個名詞比較陌生。其實,在化學化工醫藥等廣泛采用的層析法以及薄層色譜就是最為典型的制備色譜。下面對制備色譜中的一些常用概念做一下介紹。 (1)分析色譜的目的,是分析出混合物中一個(或者幾個)純物質的
1 制備色譜到底是什么? 答;有些搞分析色譜的朋友,對制備色譜這個名詞比較陌生。其實,在化學化工醫藥等廣泛采用的層析法以及薄層色譜就是最為典型的制備色譜。下面對制備色譜中的一些常用概念做一下介紹。(1)分析色譜的目的,是分析出混合物中一個(或者幾個)純物質的含量。制備色譜的目的,是從混合