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準備好恒流泵、分部收集器、核酸蛋白檢測儀及記錄儀打開柱上端的螺絲帽塞子，吸出層析柱中多余液體直至與膠面相切沿管壁將5%丙酮溶液0.6 mL小心加到凝膠床面上，應避免將床面凝膠沖起 （參考完成時間11：30）打開下口夾子，使樣品溶液流入柱內，同時收集流出液，當樣品溶液流至與膠面相切時，夾緊下口夾子按加樣操作，用1 mL洗脫液沖洗管壁2次加入3－4 mL洗脫液于凝膠上，旋緊上口螺絲帽將層析柱進水口連通恒流泵，柱出水口與核酸蛋白質檢測儀比色池進液口相連，比色池出液口再與自動部分收集器相連，用兩根導線將檢測儀與記錄儀連接起來，設置好基線的位置洗脫時，打開上、下進出口夾子，用0.02mol/LpH8.0的PBS，以0.5～1 mL/min流速洗脫，記錄tr(記錄儀紙速設為12cm/h，電壓200mv；核酸蛋白監測儀檢測波長254nm，靈敏度為0.1A)， 計算單位高度的柱效 （參考完成時間16：00）柱效計算公式：N = 5.54......閱讀全文
（1）、裝柱前要仔細看填料的使用說明書，每種填料都有自己的特性，以及特殊的裝柱方法，針對不同的空柱，也要注意方法可能不同；3、這一點非常重要：裝柱包括以后使用中絕對不允許柱內進入氣泡（bubble free），柱頭事先也要排除氣泡。（2）、填料要加水攪拌成均勻懸液，懸液濃度依填料而不同，一般70－8
一、液相色譜理論發展簡況 色譜法的分離原理是：溶于流動相( phase)中的各組分經過固定相時，由于與固定相(stationary phase)發生作用(吸附、分配、離子吸引、排阻、親和)的大小、強弱不同，在固定相中滯留時間不同，從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。 色譜法最早是由俄
制備液相色譜基礎知識： 一、制備液相色譜理論發展簡況 色譜法的分離原理是：溶于流動相( phase)中的各組分經過固定相時，由于與固定相(stationary phase)發生作用(吸附、分配、離子吸引、排阻、親和)的大小、強弱不同，在固定相中滯留時間不同，從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層
固相萃取技術作為一種樣品前處理方式，有機溶劑消耗量少，可批量處理樣品，既可富集，又能除雜質。但目前該技術在國內市場的應用仍有限，這與使用方式和期望有關，也與技術本身的局限性有關。固相萃取可以作為前處理手段的一個很好補充，但是在使用時，一定要了解其優點和缺點，揚長避短。 固相萃取（Solid
1.生物大分子的純化凝膠過濾是依據分子量的不同來進行分離的，由于它的這一分離特性，以及它具有簡單、方便、不改變樣品生物學活性等優點，使得凝膠過濾成為分離純化生物大分子的一種重要手段，尤其是對于一些大小不同，但理化性質相似的分子，用其它方法較難分開，而凝膠過濾無疑是一種合適的方法。例如對于不同聚合程度
生物分子下游純化的對象一般包括蛋白、酶、重組蛋白、單抗、抗體及抗原、肽類、病毒、核酸等。純化前首先需要測定生物分子的各物理和化學特性，然后通過實驗選擇出最有效的純化流程。 1.測定------分子量、PI &nbs
凝膠過濾層析是一項重要的蛋白質純化技術，又稱為大小排阻、凝膠排阻、分子篩或凝膠過濾層析這種方法利用分級分離，而不需要蛋白質的化學結合，這就明顯降低了因不可逆結合所致的蛋白質損失和失活。另外，可利用此法更換蛋白質的緩沖液或降低緩沖液的離子強度。在蛋白質純化操作中何時使用凝膠過濾，還不能一概而論，有時純
方法cDNA 末端的削平1.cDNA樣品（來自步驟 11)于 68°C 加熱5 min。這一步驟是使cDNA分子的單鏈突出端可能形成的雙鏈結構發生變性。2. 將cDNA溶液冷卻至37°C并加入下列試劑：5xT4噬菌體DNA聚合酶修復緩沖液 &n
HeLa 細胞核提取物的 Sephacryl S-300 HR 柱層析實驗 試劑、試劑盒
凝膠過濾層析法 實驗方法原理 凝膠過濾層析是根據蛋白質分子大小不同而達到分離效果的，凝膠過濾填料中
實驗方法原理 凝膠過濾層析是根據蛋白質分子大小不同而達到分離效果的，凝膠過濾填料中含有大量微孔，只允許緩沖液及小分子量蛋白質通過，而大分子蛋白質及一些蛋白復合物則被阻擋在外。因此，高分子量的蛋白質在填料顆粒間隙中流動，比低分于量蛋白更早地被洗脫下來。最大的蛋白質分子最早流出柱子，因為它們在到達柱底前
試劑、試劑盒 HeLa 細胞核提取物Sephacryl S-300 HR液氮TM 緩沖液+0.1mol LKCl儀器、耗材 XK26 40 柱實驗步驟 材料與設備HeLa 細胞核提取物（從 12L 細胞培養物制得，見 pp.9l~93)(5-ml 樣品)XK26/40 柱（Pha
HeLa 細胞核提取物Sephacryl S-300 HR液氮TM 緩沖液+0.1mol LKCl儀器、耗材XK26 40 柱實驗步驟材料與設備HeLa 細胞核提取物（從 12L 細胞培養物制得，見 pp.9l~93)(5-ml 樣品)XK26/40 柱（PharmaciaBiotech，Inc.)
試劑、試劑盒 無菌的過濾水 乙腈 乙酸銨 正丁醇 不含指示染料的甲酰胺凝膠加樣緩沖液
試劑、試劑盒 無菌的過濾水乙腈乙酸銨正丁醇不含指示染料的甲酰胺凝膠加樣緩沖液甲酰胺指示染料混合液甲醇：水溶液寡核苷酸洗脫緩沖液TE 溶液合成寡核苷酸粗制品儀器、耗材 MillexHV 濾器石蠟封口膜或熒光薄層層析板Sep-Pak 傳統層析柱注射器紫外燈水浴加熱器實驗步驟 材料緩沖液和溶液稀釋緩存液至
試劑、試劑盒無菌的過濾水乙腈乙酸銨正丁醇不含指示染料的甲酰胺凝膠加樣緩沖液甲酰胺指示染料混合液甲醇：水溶液寡核苷酸洗脫緩沖液TE 溶液合成寡核苷酸粗制品儀器、耗材MillexHV 濾器石蠟封口膜或熒光薄層層析板Sep-Pak 傳統層析柱注射器紫外燈水浴加熱器實驗步驟材料緩沖液和溶液稀釋緩存液至適當濃
一、實驗目的酶是植物體內具有催化作用的蛋白質，植物體內的生化反應，一般都是在酶的作用下進行的，沒有酶的催化反應，植物的生命也就停止了，因此對酶的研究是闡明生命現象本質中十分重要的部分。為要研究酶首先要將酶從組織中提取出來，加以分離、純化，不同的研究目的對酶制劑的純度要求也不相同，有些工作只需要粗的酶
色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類。多為金屬或玻璃制作。有直管形、盤管形、U形管等形狀。液相色譜通常均采用填充柱。色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相，以及色譜柱的制備和操作條件。 1、網上對柱子是否可以反沖一直有爭論，那什么樣的柱子可以反沖，什么不可以。反沖后是正者用，還是反著用。具體到各型號
5. 正相色譜與反相色譜 正相色譜是指固定相的極性高于流動相的極性，因此，在這種層析過程中非極性分子或極性小的分子比極性大的分子移動的速度快，先從柱中流出來。 反相色譜是指固定相的極性低于流動相的極性，在這種層析過程中，極性大的分子比極性小的分子移動的速度快而先從柱中流出。&
原理 酶是植物體內具有催化作用的蛋白質，植物體內的生化反應，一般都是在酶的作用下進行的，沒有酶的催化反應，植物的生命也就停止了，因此對酶的研究是闡明生命現象本質中十分重要的部分。 為要研究酶首先要將酶從組織中提取出來，加以分離、純化，不同的研究目的
（二）乳過氧化物酶法（LPO） 本法反應溫和，對抗原、抗體免疫活性影響小，已被廣泛應用。缺點是標記率較低，一般為20～40%。 1．原理此法是利用乳過氧化物酶（Lactoperoxidase）有促進微量過氧化氫對125I-的氧化作用，生成125I+，并標記在多肽、蛋白質酪氨酸分子上。 2．方法
一、RNA 制備 模板mRNA 的質量直接影響到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的結構特點,容易受RNA 酶的攻擊反應而降解,加上RNA 酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA 酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA 酶,人
ICS 67.100.10X 04GB/T 18980-2003乳和乳粉中黃曲霉毒素M,的測定免疫親和層析凈化高效液相色譜法和 熒 光 光 度 法Determination of aflatoxin M1 content in milk and milk powder-Cleanup by immu
實驗原理凝膠層析又稱凝膠過濾，是一種按分子量大小分離物質的層析方法。該方法是把樣品加到充滿著凝膠顆粒的層析柱中，然后用緩沖液洗脫。大分子不能進入凝膠顆粒中的靜止相中，只留在凝膠顆粒之間的流動相中，因此以較快的速度首先流出層析柱，而小分子則能自由出入凝膠顆粒中，并很快在流動相和靜止相之間形成動態平衡，
實驗材料 mRNA 顯示蛋白翻譯反應產物試劑、試劑盒 Oligo 纖維素Oligo（dT）結合緩沖液Oligo 洗滌緩沖液Ni-NTA 瓊脂糖NI-NTA 結合緩沖液Ni-NTA 洗脫緩沖液鮭精 DNABSADNA splintSuperscript Ⅱ 逆轉錄酶緩沖液DTT脫氧核苷三磷酸S
實驗材料mRNA 顯示蛋白翻譯反應產物試劑、試劑盒Oligo 纖維素Oligo（dT）結合緩沖液Oligo 洗滌緩沖液Ni-NTA 瓊脂糖NI-NTA 結合緩沖液Ni-NTA 洗脫緩沖液鮭精 DNABSADNA splintSuperscript Ⅱ 逆轉錄酶緩沖液DTT脫氧核苷三磷酸Supersc
實驗材料 mRNA 顯示蛋白翻譯反應產物 試劑、試劑盒 Oligo 纖維素
VI 凝膠層析法分離純化蛋白質一、目的了解凝膠層析的基本原理，并學會用凝膠層析分離純化蛋白質。二、原理凝膠層析也稱凝膠過濾、凝膠過濾層析、分子排阻層析和分子篩層析。凝膠是具有一定孔徑的網狀結構物質，凝膠層析是一種分子篩效應，主要用于分離分子大小不同的生物大分子以及測定其相對分子質量。相對分子質量小的
28) 首先我想問一下agarose和sepharose區別,我的理解是:都指瓊脂糖,但agarose是未連接其他介質的,而sepharose是連接其他介質的,不知理解對不對?請指教!Glutathione-agarose(4%cross-linked beaded agarose)和Glutath
凝膠過濾也稱排阻層析、分子篩層析和凝膠層析。本實驗目的是了解凝膠過濾層析法測定蛋白質分子量的基本原理，鞏固柱層析的操作方法。實驗方法原理凝膠過濾( Gel Filt ration ) 也稱排阻層析( Exclusion Chromatography)、分子篩層析(Molecular Sieve Ch