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1. 印跡膜制備 按常規方法完成SDS-PAGE和電轉膜操作,適當的封閉非常重要。可以通過標記一抗或二抗的手段引入HRP,一般采用市售的HRP二抗交聯物。仔細地淋洗對于降低背景非常重要,在與HRP交聯物溫育后,膜片更需仔細洗滌,所有步驟均在室溫下完成。2. 化學發光試劑的配置 在使用前等量混合a液和b液,混合后盡快使用。將膜片置混合液中于室溫下振蕩溫育2分鐘,每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆蓋全膜片。3.蛋白信號顯現1). 用平頭鑷鉗住膜片,垂直置于吸水紙以吸去過量試劑。2). 置膜片于二層保鮮膜之間,小心趕盡氣泡。3). 將膜片吸附蛋白面朝上,置于x光片盒中。4). 于暗室中壓上x光片。5).根據信號的強弱適當調整曝光時間,一般為1min或5min,也可選擇不同時間多次壓片,以達最佳效果。顯影沖洗。6). 調節曝光時間,再次曝光顯影。4、膜的重復使用:配置62.5mm tris-hcl,ph6.7,2%sds, 7......閱讀全文
1. 印跡膜制備 按常規方法完成SDS-PAGE和電轉膜操作,適當的封閉非常重要。可以通過標記一抗或二抗的手段引入HRP,一般采用市售的HRP二抗交聯物。仔細地淋洗對于降低背景非常重要,在與HRP交聯物溫育后,膜片更需仔細洗滌,所有步驟均在室溫下完成。2. 化學發光試劑的配置 在使用前等量混合a液和
在化學發光反應中參與能量轉移并最終以發射光子的形式釋放能量的化合物稱為化學發光劑或發光底物。在發光免疫技術中常用的化學發光底物有以下幾類。 1、氨基苯二酰肼類主要是魯米諾及異魯米諾衍生物，是最常用的一類化學發光劑。魯米諾（luminol，5＇-氨基-2，3-二氫-1，
根過氧化酶使試劑中的發光物(luminol)氧化并發光,而試劑中含有增強劑這使得發光增強了1000倍。在免疫印跡中,將復雜的蛋白混合物經sds-page分離,并轉移到固相膜上(如nc、pvdf)等,用于免疫學檢測,經HRP標記的抗體與膜上的蛋白直接(標記一抗)或間接(標記二抗)反應。
非放射性發光系統,用于檢測固定在膜上的蛋白,其敏感性達1-5pg。用x光片可快速地獲得永久的硬拷貝結果。所含獨特的底物足以維持12小時以上的發光,便于反復曝光操作,免疫印跡膜經抗體脫卸處理后可供再次抗體探查使用。適用于痕量蛋白或核酸檢測。
1. 試劑每個批號均獨立優化,請不要混用或稀釋試劑以免降低敏感性;2. 加入一抗后膜不能再干燥;3. 適當地封閉和洗滌膜片至關重要;4. 使用前配置化學發光試劑,配置足夠覆蓋膜片即可,棄去使用過的混合試劑;5. 使用干凈取樣頭取用每種試劑;6. 第一張片子建議曝光1分鐘,觀察結果后判斷最佳曝光時間可
化學發光及免疫分析、受體分析、核酸及多肽檢測等研究。作為直接化學發光免疫分析的化學發光劑，用于抗原、抗體、蛋白質等的檢測分析。檢測分析過程中無需附加催化劑，DMAE-NHS在堿性介質中被H2O2氧化時，經過一個二氧化酮的中間體，產生電激發的N-甲基吖啶酮，其返回基態時，在430nm處釋放光子
在臨床實驗中，要求所有項目均應該嚴格按照標準化操作程序（SOP）進行操作，但實際工作中由于人為或外界因素，實驗進程往往會受到干擾，對結果造成一定影響。促甲狀腺激素（thyroid stimulating hormone，TSH）是判斷甲狀腺功能是否正常的首選指標，化學發光法因具有快速、準確、靈
更換其它二抗,再次進行檢測;再次檢測結果仍為陰性,證明底物喪失活性。
認為二抗及底物活性良好； Western Blot 系統需要進一步優化 優化抗原和抗體濃度的斑點雜交方法:斑 點 雜 交 方 法——優 化 抗 原 和 抗 體 濃 度 對于一個給定的抗原,抗體濃度依賴的抗原和抗體本身。抗原和抗體的親和力,以及一抗與二抗的特異反應都是不同的。抗原和抗體濃度可通
認為二抗及底物活性良好； Western Blot 系統需要進一步優化 優化抗原和抗體濃度的斑點雜交方法:斑 點 雜 交 方 法——優 化 抗 原 和 抗 體 濃 度 對于一個給定的抗原,抗體濃度依賴的抗原和抗體本身。抗原和抗體的親和力,以及一抗與二抗的特異反應都是不同的。抗原和抗體濃度可通